Virus hepatitisa C (HCV) je virus, ki vsebuje RNA, iz družine Flaviviridae. Ta okužba se lahko reproducira v krvnih celicah (monociti, nevtrofili, B-limfocitih in makrofagih) in tudi poškoduje celice jeter samega - hepatociti. Zaradi visoke stopnje mutacijskega delovanja se ta vrsta hepatitisa lahko izogne ​​vplivu človeškega imunskega sistema.

Obstaja 11 genotipov in masa podtipov takega virusa, ki se razlikujejo glede na stopnjo poškodbe jeter in vplivajo na časovno obdobje zdravljenja s hepatitisom. Tovrstna vrsta hepatitisa C zahteva različne metode protivirusnega zdravljenja. Na primer, hepatitis 1. in 4. genotipov je treba zdraviti 48 tednov, za zdravljenje proti virusom druge in tretje vrste pa lahko traja le 24 tednov.

Po hitrem testu na hepatitisu C je bil pozitiven rezultat, se izvaja PCR analiza za identifikacijo RNA virusa v vzorcih krvi.

PCR diagnostiko

Polimerazna verižna reakcija (PCR) je eksperimentalna tehnika za odkrivanje virusov. Takšna analiza za hepatitis C omogoča znatno povečanje koncentracije nekaterih fragmentov DNA ali RNA virusa v predloženih vzorcih. To jim omogoča prepoznavanje in celo štetje števila.

Ta preizkus za hepatitis C se izvede v skladu z naslednjim postopkom:

1. V epruveto se vnese krvni vzorec (genski material), ki lahko vsebuje želeni gen hepatitisa. Za njeno postavitev posebnih snovi - primerkov, so segmenti kratke dolžine od želenega gena, ki se sintetizirajo kemično. V tej posodi je dodana tudi DNA ali RNA polimeraza, ki je sposobna zgraditi verige nukleinske kisline, popolnoma identične z originalnim. V dobljeni sestavi dodamo izbor prostih nukleotidov, ki so poseben gradbeni material za DNA in RNA, od katerih ena vsebuje drobne delce radioaktivnega fosforja.
2. Nastala mešanica se najprej segreje na 95 stopinj, zaradi česar je prepletena v normalnem stanju, zato sta oba DNA heliksa oslabljena zaradi tega učinka.
3. Če želite nadaljevati analizo, se zdravilo ohladi, na tej točki so primerji pritrjeni na želeno področje genoma virusa hepatitisa, ki ne omogočajo, da bi DNA nastala v dvojni vijačnici. Ko se mešanica ohladi, polimeraza išče posamezne pramene nukleotidov. Med pritrditvijo tega encima drsi vzdolž DNA drogove (kot je blok z vrvjo) in na dvojni vijačnik ne more delovati, zato se zmes segreva.
4. Za podaljšanje analize se izvaja ponovno segrevanje, kar ponovno vodi do ločitve nukleotidnih verig. Pri izvajanju takih PCR ciklov v vzorcu se število gejevskih hepatitskih genov povečuje v geometrijskem razmerju, preostali genski materiali pa se proizvajajo (oblikujejo) le v linearni pravilnosti.
5. Za dokončanje študije raztopino očistimo iz ostankov nukleotidnih delcev. Ločeni so z elektroforezo, z ločitvijo verig molekularne DNK s parametri molekulske mase. Takšni testi za hepatitis s pomočjo PCR omogočajo ugotavljanje, ali so želeni geni virusa prisotni v testnem vzorcu ali ne.

Prednost tega testa je zelo visoka občutljivost PCR reakcije. Takšna tehnika za izvajanje diagnostike v idealnem primeru zahteva samo en genom virusa za celoten vzorec.

Poleg tega je tak PCR popolnoma specifičen. V vsakem od genov obstaja edinstveno zaporedje nukleotidov, ki kot prstni odtis nikjer ne moremo ponoviti. Za to analizo hepatitisa C se primarne snovi sintetizirajo tako, da popolnoma ustrezajo edinstvenim delom želenih genov, ki jih nima nobenega drugega zaporedja.

Ta tehnika prav tako omogoča analizo in določanje hepatitisa v, kar pomaga ugotoviti dokončno diagnozo.

Takšna laboratorijska analiza omogoča pridobivanje informacij več kot le prisotnost ali odsotnost HCV RNA ali druge vrste v vzorcih krvi. Opredelitev parametra radioaktivnega sevanja je tudi možnost, da se razkrije, koliko je želenega genskega materiala prvotno ugotovil v vzorcu, ki ga proučujemo. To nam omogoča, da določimo parameter tako imenovane virusne obremenitve - koncentracijo delcev RNA s hepatitisom v določeni količini.

Kvalitativna PCR analiza

Ta analiza omogoča ugotavljanje prisotnosti virusa hepatitisa v vzorcih krvi. To je treba storiti za vse ljudi, za katere je bilo ugotovljeno, da imajo protitelesa proti hepatitisu.

Kot rezultat takšne študije lahko obstajata le dve vrednosti:

• "Odkrito." Takšen pozitivni rezultat testa se razlaga takole: v analiziranem vzorcu iz biološkega materiala so bili najdeni fragmenti RNA virusa hepatitisa. Iz tega sledi, da je prišlo do dejstva okužbe bolnika s tem virusom. To lahko pomeni, da se povzročitelj hepatitisa multiplicira v telesu in okuži nove celice in uniči jetra.
• "Ni zaznati". Ta rezultat kaže, da v vzorcu, ki je analiziran v laboratoriju, so našli fragmente RNA, ki je specifično za virus hepatitisa C Obstaja tudi možnost, da je koncentracija RNA virusa-patogena v vzorcu tako majhen, da test ni bil sposoben identificirati. V takih primerih je rečeno, da je raven koncentracije pod pragom občutljivosti testa.

Tak preizkus lahko tudi lažno pozitivni ali lažno negativen zaradi kontaminacije biološkega materiala ali prisotnost določenih snovi v vzorcih, reagiranje s kemične sestavine, potrebne za analizo.

Poudariti je treba, da lahko v akutnih fazah hepatitisa C kvalitativna študija z metodo PCR odkrije svojo RNA po le 1-2 tednih od trenutka okužbe telesa. To pomeni, da se bolezen lahko identificira že dolgo pred pojavom zunanjih simptomov ali pojavom protiteles proti hepatitisu v telesu.

Vzorčenje krvi (iz vene) se prednostno izvede na praznem želodcu.

Kvantitativna analiza PCR

S pomočjo te analize določite stopnjo koncentracije virusa hepatitisa pri bolniku (virusna obremenitev). Takšen preskus je treba predložiti, da se oceni količina RNK virusa v enoti določene količine.

Analiza preskusov za hepatitis c, izvedenih po tej tehniki, lahko prinese naslednje rezultate:

• Količinski kazalnik (v številkah)

Koncentracija virusa (število) je podana v numeričnih izrazih. Za to se uporabljajo različne enote: bodisi ME / ml (mednarodna enota na mililiter) ali kopije / ml (število kopij virusne RNK v mililitrih). V povprečju 1 IU / mL ustreza 4 kopije / ml, saj imajo različni preskusni sistemi različne takšne enote.

Za to analizo velja, da je nizka virusna obremenitev manjša od 400.000 ie / ml in visoka je 8000000 ie / ml.

Ta kvantitativna ocena omogoča določitev ravni infektivnosti bolezni ("nalezljivost") bolnika. Bolj ko je ta kazalnik analize, večja je nevarnost prenosa patogena na druge ljudi (s spolnim stikom ali navpično potjo).

Ta razsodba pomeni, da kvantitativna metoda ni mogla odkriti RNK hepatitisa, vendar je virus v telesu prisoten le v zelo nizki koncentraciji. To je bilo potrjeno z izvedbo dodatne kvalitativne analize PCR, njegov pozitiven rezultat pa kaže na prisotnost hepatitisa.

Rezultat "Ni zaznan"

Ta pozitivna razlaga analize kaže na to, da sama kvantitativna preiskava v vzorcu krvi ne more zaznati specifičnih delcev RNK virusa hepatitisa C.

Kvantitativna analiza PCR poteka v različnih fazah protivirusnega zdravljenja (1., 4., 12. in 24. tednov) po kaže učinkovitosti zdravljenja in da naredi potrebne popravke.

Posebnost analize

Ta test je treba opraviti, da bi opredelili različne genotipe hepatitisa C je sedaj znanih genotipov dajalcem impulzov 11 in več podtipov. Genotipe hepatitisa C prve, druge in tretje vrste so pogosti v naši državi. V laboratorijih lahko zazna različne podtipe teh vrst: 1a, 1b, 2a, 2b, ali 3, 4, 5, 6 genotipov v različnih oblikah podvrstami. Za vse te hepatitis je specifičnost detekcije 100%.

Pojasnitev spremembe genotipa omogoča izbiro primernega zdravljenja. Prisotnost določenega tipa genotipa pri bolniku ne kaže na to, da je bolezen lažja ali težja, so le sorte virusa hepatitisa in ne več.

V primerih, ko laboratorij ne more izolirati genotipa virusa, se lahko izda rezultat: "Ni vnesen. Raziskali smo genotipe: taki in taki (npr. 1a, 2b, 3av). Ta prepis nakazuje, da v tem laboratoriju ni bilo ustreznih reagentov, ki bi lahko določili genotip virusa hepatitisa. V študiji so bili pregledani virusi, navedeni na seznamu, vendar njihova korespondenca z vzorci RNA ni bila odkrita.

Za dokončno diagnozo je samo ena vrsta analize nezadostna. Vsak od testov lahko daje lažno pozitiven rezultat. Za določitev natančne vrste hepatitisa in stopnje okužbe s to okužbo telesa opravljamo kompleksno študijo. Istočasno se izdeluje biopsija jeter in testiranje njegovih encimov: ALAT, ASAT, kot tudi alkalna fosfataza in LDH. Prav tako se lahko izvede analiza bilirubinskega testa in protrombinskega indeksa.

Le kompleks teh testov in laboratorijskih testov s splošno analizo bolnikovega stanja bo pomagal ugotoviti prisotnost hepatitisa v telesu, njegovo obliko in stopnjo resnosti. Na podlagi tega lahko zdravnik določi nadaljnje zdravljenje in izvede morebitne napovedi za bolnika.

Kvalitativna analiza za hepatitis C

Pustite odgovor

Kvalitativna analiza polimerazne verižne reakcije - PCR za hepatitis C določa prisotnost ali odsotnost HCV v telesu. V laboratoriju se proučuje struktura RNK, v kateri se nahaja virus. Če se odkrije virus C, je treba opraviti potek zdravljenja, ker zapostavljeno stanje jeter povzroči resne posledice. Kvalitativni PCR se izvede po okrevanju, da potrdi odsotnost protiteles. Imenovani in za preventivni pregled. Z nizko koncentracijo patogena v krvi, PCR (kvalitativna) ne more zaznati ničesar, ker diagnostični sistem ima svoje prage občutljivosti. V primeru začetne stopnje bolezni ali blagih oblik je na PCR končno diagnosticirana ultrazvočna oprema.

Kaj je virus RNA?

Izraz RNA virusa hepatitisa C (ali RNA virusa hepatitisa C) se imenuje sama bolezen jeter. Virus C se veže na zdravo telo celice, ki prodira v notranjost. Sčasoma se razprostira po celem telesu, le da pride v kri. Posledično patogen prodre v jetra, varovalke s svojimi celicami in trdo deluje. Jetrne celice (hepatociti) delujejo pod svojim vplivom, spreminjajo se in od tega propadajo. Dlje, ko je virus C v jetrih, več celic umre. Sčasoma se razvijejo nevarne bolezni, ki povzročajo maligno degeneracijo in smrt.

Okužbe jeter s to vrsto virusa ne moremo nikakor izzvati zunaj. Že več let ali deset let se okuženi osebi zdijo povsem zdravi, le najpogostejši neželeni poizkus pa odkrije patologijo. Pri darovanju krvi za hepatitis preučujemo del verige RNK (ribonukleinske kisline), ki je del človeškega gena (DNK). Rezultati laboratorijskih raziskav se ne smejo uporabljati samo za samozdravljenje, ker je to le kazalnik. Zdravnik bo določil natančno sliko in nadaljnjo diagnozo.

Ko končate: pričevanje študije

Za potrditev HCV je dodeljena PCR analiza (polimerazna verižna reakcija). Študije PCR pomagajo najti patogeni material v strukturi RNA in predpisati učinkovito zdravljenje. Imenuje se v naslednjih primerih:

• prepoznavanje znakov vnetja jeter;
• presejalne študije za preprečevanje;
• pregled oseb, ki so v stiku;
• diagnoza hepatitisa mešanega izvora (opredelitev glavnega patogena);
• Določitev ravni aktivnosti razmnoževanja virusa v kronični obliki;
• ciroza jeter;
• za določitev učinkovitosti predpisanega zdravljenja.

Zdravnik določi študije PCR za določitev učinkovitosti zdravljenja za hepatitis.

Obstaja kvalitativna in kvantitativna analiza PCR. Kvantitativni PCR prikazuje odstotek RNA z nosilci virusa v krvi, kakovostni PCR pa kaže na virusno prisotnost ali odsotnost. Pozitiven kazalnik kakovosti (prisotnost hepatitisa C RNA) zahteva tudi kvantitativno študijo. Visoka stopnja koncentracije patogena hepatitisa C je povezana s tveganjem prenosa, to je kontaminacije drugih. Nizke količine se bolje zdravijo. Količina virusa RNA v krvi ni povezana z intenzivnostjo bolezni. Analiza PCR je izvedena tudi v primeru interferonske terapije, da bi predpisali trajanje in kompleksnost zdravljenja.

Značilnosti kvalitativne analize PCR za hepatitis C

Kakovostna analiza z indeksom verižne reakcije s polimerazo je dodeljena vsem bolnikom, ki imajo v krvi protitelesa proti hepatitisu C. Kdo je regeneriral in predelal, je treba ponovno testirati. Priporočamo, da se opravi analiza o hepatitisu B, nato v primeru pozitivnega zaključka in o hepatitisu D. Tudi kvalitativno analizirana reakcija je treba opraviti v povezavi z drugimi krvnimi preiskavami. Analize bodo pokazale popolno sliko širjenja virusa.

Iz rezultatov testa bo prikazan le pozitivni test za hepatitis C ali negativen, to je prisotnost ali odsotnost virusa. Če je ugotovitev "odkrita", potem je virus aktiven in še naprej deluje. Oznaka "ni bila najdena" označuje odsotnost virusa ali majhne količine. S tem indikatorjem je treba upoštevati dejstvo, da je analitska občutljivost diagnostičnih sistemov drugačna in da je RNA hepatitis C še vedno v krvi, vendar ni očiten pri analizi.

Posebno občutljiva metoda PCR ultra-hepatitisa C se kaže tudi v skromnih količinah. Uporablja se hibridizacijsko fluorescenčna študija, ki je večkrat višja od standardnih PCR sistemov. Metoda se uporablja v več primerih:

• sumljive skrite oblike hepatitisa C;
• Patogen je potrdil diagnozo PCR, vendar so protitelesa;
• v primeru izterjave;
• ugotoviti zgodnjo stopnjo okužbe.

Nazaj na vsebino

Pojasnilo analize

Na končno odločitev pri diagnozi vplivajo PCR dekodiranje HCV, zlasti z ultramethodom. Glavna pomanjkljivost te raziskave je strogo spoštovanje sterilnih pogojev za vzorec in materiale. Majhno odstopanje včasih kaže nenatančne zaključke analitika, otežuje diagnozo in nadaljnje zdravljenje. Analiza PCR za določanje RNK virusa hepatitisa z zaupanjem ne kaže vedno slike bolezni, včasih so netočnosti sprejete obeh načinov.

Pri diagnosticiranju virusa hepatitisa je priporočljivo uporabiti celovit pregled.

Norm kazalnikov

Odsotnost JgM protiteles proti RNA pri virusnem hepatitisu C velja za normo pri analizi verižne reakcije s polimerazo. Istočasno ugotovitve serološke analize kažejo prisotnost protiteles proti virusu C, kar je tudi v mejah norme. Kvalitativna definicija ne kaže intenzivnosti bolezni, le odkrije vzročni povzročitelj hepatitisa C v RNA. Taka analiza se ponovi po zdravljenju, da se potrdi dejansko okrevanje.

Odstopanja

Če so prisotna JgM protitelesa proti HCV RNA, to kaže na razvojno okužbo. Bolezen je akutna ali kronična, se manifestira v različnih fazah. Če se zabeleži zmanjšanje števila protiteles, bo analiza pokazala doseganje rezultatov zdravljenja med okrevanjem. V diagnozi so zelo redki primeri napačnih pozitivnih ugotovitev. Najdejo jih pri ženskah med nosečnostjo in pri ljudeh z drugimi nalezljivimi boleznimi.

RNA hepatitis s kvantitativno normo

Virus hepatitisa C se lahko reproducira v krvnih celicah in povzroči limfoproliferativne bolezni. Zahvaljujoč večkratnim mutacijam so telesne imunske obrambe oslabljene, pojavijo se genotipi in podtipi virusa. S pravilnim in pravočasnim prepoznavanjem določene vrste je odvisna učinkovitost protivirusnega zdravljenja. Nevarnost okužbe je, da je bolezen asimptomatična. Skupaj 15 odstotkov od 100 lahko doživi navzeo in bruhanje, hujšanje in zvišano telesno temperaturo.

Opredelitev virusa hepatitisa C.

Standardna norma hepatitisa C je velikosti od 40 do 60 nm, z večino lipidov, poškodbe jeter zaradi akutnega ali kroničnega sevanja bolezni. Hepatitis C, in sicer RNA virus iz družine Togaviridae, izredno odporna, se prenaša s transfuzijo krvi ali uporabe, ki niso sterilni predmetov, nepravilna higiena kopalniške opreme in drugo. Kvantitativna analiza vam omogoča pregled krvi in ​​prepoznavanje genetske strukture okuženega virusa.

Za hepatitis C in njegove genotipe, ki jih je treba določiti, se izvede kvantitativna analiza. Odvisno od analizatorja lahko določimo tri stopnje incidence virusa RNA.

Podtipi lahko proizvedejo različne modifikacije, zato mora biti specifičnost in občutljivost analizatorja sto odstotkov. Poleg odkrivanja bolezni pri pacientu je treba določiti stopnjo njegove resnosti. Nekateri laboratoriji nimajo vseh podatkov o definicijah virusa RNK, obstaja možnost lažnega pozitivnega odziva.

Študija o hepatitisu C bo natančnejša pri proučevanju takšnih kazalcev:

ALAT, ASAT; ŜF; LDH.

Pri tem opozarjamo na rezultate teh kazalnikov in splošno stanje telesa, prikaže se rezultat, ki prikazuje stopnjo okužbe, obliko in število celic hepatitisa C v krvi. To prispeva k zdravljenju in učinkovitosti protivirusnega zdravljenja.

Vrste analiz za hepatitis C

Polidizirana verižna reakcija (PCR) daje idejo o količini delcev DNK v pacientovih analizah in pravilno identificira povzročitelje okužbe.

Infektivni dejavniki se lahko manifestirajo. Takšna nalezljiva jetrna bolezen, kot je hepatitis C, se danes zdravi, če je odkrit v času. Če sumimo na virus, se opravi PCR analiza.

S tem, dolgo časa simptomi virusa lahko prikriti, lahko ne čutijo začetek bolezni. Toda pazite, preiskava je pokazala, 60-70% primerov hepatitisa C, primarno analizo, v kateri - to IFA, ki mu sledi PCR diagnostiko. Analiza se opravi v določenih obdobjih, da se določi stopnja bolezni in da se predpisuje ustrezno zdravljenje. Ali brez njega, brez uporabe vseh teh postopkov, lahko, cepljenje iz hepatitisa.

Analiza, vključno s PCR diagnostiko, zagotavlja sliko bolezni, kako aktiven je virus v različnih obdobjih razvoja.

Prvič pride kvalitativna analiza, ki potrjuje le hipotezo o okužbi, nato pa kvantitativno, ki določa obremenitev jeter. Idealna možnost je negativen rezultat za hepatitis C v pacientovem genskem materialu.

Kvalitativna in kvantitativna analiza

Obstajajo kvalitativne in kvantitativne analize. Bistvo prvega je, da ugotovi prisotnost okužbe v krvi. In to pomeni, da virus prizadene zdrave jetrne celice. Ko ima bolnik protitelesa proti hepatitisu C, se takoj opravi kvalitativni test. Norma, ki naj bi rezultat povzročila, "ni odkrita v krvi". Pri določanju koncentracije virusa je treba poznati občutljivost diagnostičnega sistema, saj lahko analizo opravijo ljudje, ki se zdravijo z protivirusno terapijo. Občutljivost analizatorja ne sme biti manjša od 50 ie / ml.

Ko odkrijemo virus, naredimo kvantitativno analizo, z drugimi besedami, virusno obremenitev, ki določa koncentracijo virusa v krvi in ​​resnost bolezni.

Virusna RNA, ki je v določeni količini krvi, je definirana kot norma s hitrostjo 1 ml na 1 centimeter kubično. Po količinski opredelitvi virusne obremenitve je mogoče oceniti stopnjo okužbe neokuženega okolja. Takoj, ko koncentracija hepatitisa C v krvi naraste, mora biti okolje izolirano.

Na prvih stopnjah je pomembno ugotoviti stopnjo koncentracije hepatitisa, da bi ugotovili hitrost rehabilitacije. Če je stopnja hepatitisa C presežena za več kot 800 tisoč ie / ml, se šteje za previsoko, s povečanjem na milijon kritičnih. Če je količinsko območje manj kot 400 tisoč IE / ml, se šteje, da se bo onesnaženje drugih pojavilo z manjšo verjetnostjo. V tej številki je razvidno, da je hepatitis C v telesu prisoten v zelo majhnih odmerkih. Analiza ni mogla določiti količinske vrednosti RNK virusnih delcev, zato je za točnost diagnoze večkrat dodeljena.

Rezultati kvantitativne analize

Naloga določanja količine virusnega bremena v pacientovi krvi je ugotoviti obseg okužbe za druge.

Analiza za hepatitis C

omogoča oceno učinkovitosti protivirusnega zdravljenja, stopnje infekcije in števila okuženih tkiv.

Pomembno je, da se ne dovoli napredovanja bolezni, pravočasno jemljejo preventivne ukrepe, predpisujejo pravilno zdravljenje, ki temelji na diagnostiki PCR. Če rezultati ravneh virusno breme, manjše od 400.000 ie / ml, nato koncentracija lahko minimalen, kar kaže možnost popolnega okrevanja. Norma za pozitiven rezultat je odsotnost okužbe.

Rezultati analize PCR:

Pozitiven odgovor pomeni, da v biološkem materialu obstaja okužba. Analiza vam omogoča, da določite natančno število okuženih celic. Negativen odgovor kaže na odsotnost okužbe, ki je bila skrbno preiskana v telesu.

Kvantitativna metoda za hepatitis C je natančna in informativna, izvedena na napravi z visoko občutljivostjo. Če dešifrirate rezultate analize, lahko ugotovite, ali obstaja okužba in njegova specifičnost, da vidite najmanjše število okuženih celic na visoko občutljivih analizatorjih.

Lažno pozitivni ali nasprotni rezultati analize redko daje, pogosteje se to zgodi v študijah imunskega preskušanja.

V zadnjem času se v iskalnikih internetnih virov vse bolj pojavlja poizvedba "kvantitativna analiza za hepatitis z dekodiranjem".

Dejansko je virus hepatitisa pogost in nevaren, bolezen prizadene jetra. Njeno ime je prišlo iz lat. hepatitis - vnetje jeter. Okužba se pojavi prek krvi ali prek spolnega stika, pri odraslih se verjetneje zbolijo v starosti od 25 do 50 let.

Obstaja več vrst te bolezni. Hepatitis C nima živega izraza, vendar v 40-70% primerov prehiteva v kronično obliko, lahko povzroči cirozo jeter in rak. Ta bolezen zahteva natančno diagnozo in interpretacijo pridobljenih podatkov, za katere se razvijajo metode. Ena je RNA analiza HCV RNA s PCR.

RNA analiza HCV RNA s PCR

RNA (ribonukleinska kislina) je neke vrste makromolekula, ena od sestavin živih celic. RNA je odgovorna za kodiranje genskih informacij. Virus hepatitisa C vsebuje molekulo RNK in ima navado mutirati. Obstaja šest podtipov, kot tudi veliko podtipov.

Bolezen v svoji kronični stopnji povzroča fibrozo jeter - rastjo vezivna tkiva, struktura organa se postopoma razbije. Fibroza je primerna za pravočasno zdravljenje, ker jetra še niso bile uničene. Za razliko od ciroze je huda nepovratna bolezen jeter, v kateri se lahko razvije fibroza, ne da bi pravočasno sprejeli potrebne ukrepe.

Oseba s sumom, da ima virus hepatitisa, določi protitelesa proti njej. Če niso prisotni - bolezen je izključena, pri njihovi prisotnosti se zateče k metodi PTSR (polimeraznoj verižna reakcija). V molekularni biologiji je eksperimentalen, vendar prevladuje med metodami diagnosticiranja nalezljivih bolezni. S pomočjo tega lahko bistveno poveča koncentracijo fragmentov molekul v vzorcu. 10 dni po okužbi je RNA že mogoče odkriti v krvi.

Ta metoda je edina, ki omogoča prepoznavanje bolezni v zgodnjih fazah. Na druge načine (npr. Biokemični test krvi) to ni mogoče storiti, ker jetrna okužba še ni prizadeta.

Analize za hepatitis C z dekodiranjem (PCR) so zanesljiv pokazatelj prisotnosti virusa v krvi osebe.

Metodo je leta 1993 odkril biohemičar Carrie Mullis, za katerega je prejel Nobelovo nagrado. PCR je bil preboj v medicini in znanosti, saj je omogočal hitro in natančno prepoznavanje okužb v krvi in ​​drugih bioloških materialov osebe. Z drugimi besedami, metoda pospešila razvoj diagnoze nalezljivih bolezni.

RNA analiza HCV RNA s PCR je učinkovita iz naslednjih razlogov:

Ima dobro občutljivost - odkrije se celo majhna količina virusa v krvi; sam virus je določen, in ne stranski proizvodi, ki jih ustvari; vrsta patogena je določena.

Razlike v kvantitativni analizi HCV RNA iz kvalitativnega

Metoda PCR vključuje dve osnovni metodi za preučevanje biološkega materiala za iskanje virusa hepatitisa C:

Te študije imajo različne naloge.

Kvalitativna analiza za hepatitis z dekodiranjem potrjuje prisotnost virusa, potem ko so v krvi že odkrili protitelesa proti bolezni. Če je študija pokazala pozitiven rezultat, je bila ugotovljena bolezen. Z drugimi besedami, okužena oseba. Če dobite negativni rezultat, to pomeni, da oseba ni okužena, ali pa je premajhna koncentracija virusa. Ta koncentracija se ne zazna na ta način.

Poleg tega klinična slika bolezni temelji na označbah hepatitisa C in interpretaciji analize. Glavni označevalci so imunoglobulini (protitelesa) M in G. Njihova prisotnost v pacientovi krvi kaže neenakomeren proces za zdrav organizem. Na podlagi prisotnosti teh protiteles je bolniku ponavadi diagnosticirana primarna diagnoza.

Kvantitativna analiza je predpisana za začetno odkrivanje protiteles in, če je potrebno, zdravljenje.

Prav tako je za odkrivanje mešanega hepatitisa (okužba z več virusi) predpisana kvantitativna analiza za hepatitis C.

Kvantitativno analizo z dekodiranjem izvajamo z namenom:

pojasnitev končne diagnoze; uskladitev napovedi o poteku bolezni in njenem zdravljenju - podaljšanje, zmanjšanje zdravljenja ali sprememba taktike; spremljanje terapije.

International ME / ml kaže, da se količina RNK v 1 ml krvi proučuje. Visok kvantitativni kazalnik kaže povečano verjetnost okužbe druge osebe.

Da bi zagotovili, da so rezultati pravilni, morate pred dajanjem krvi upoštevati predpisani režim:

prišli v laboratorij na prazen želodec, lahko zadnjič, ko lahko vzamete hrano, 8 ur pred postopkom; dva dni pred študijem sta alkohol, maščobna in ocvrta živila prepovedana; ultrazvok, masaža, fizioterapijo pred študijo ni mogoče izvesti; za dan je prepovedano sprejemanje zdravil, če ni mogoče preklicati sprejema posameznih zdravil, o tem poročajo pred odvzemom krvi; pred postopkom je priporočljivo čim bolj zmanjšati fizične in živčne obremenitve.

Izpolnjevanje teh zahtev bo ključno za pridobitev pravilnih rezultatov kvantitativne analize za hepatitis C.

Dekodiranje kvantitativne analize

Po prejemu indikatorjev kvantitativne analize je treba razbrati rezultate testov za hepatitis C. Rezultati se izračunajo tako v enotah ME / ml kot v kopijah na ml. Za pridobitev rezultatov, opisanih v kopiji, se uporabljajo več metod.

HCV Monitor (pretvorbeni faktor na ME - 2,7); LCX HCV RNA (pretvorbeni faktor za ME je 3,8).

Tabela. Dekodiranje kvantitativne analize HCV RNA s PCR.

Kvalitativna analiza PCR za hepatitis C

Hepatitis je resna bolezen, ki ima veliko vzrokov za pojav. V središču njenega razvoja je neposredna ali posredna poškodba jeter. Glede na njen pomen za celoten organizem lahko samo ugibate, kako slaba je patologija. V tem članku bomo podrobneje razpravljali o značilnostih tečaja in laboratorijski diagnostiki hepatitisa C.

Vzrok bolezni je virusno sredstvo, ki se nanaša na patogene, ki vsebujejo RNA. Ima posebnost - zmožnost mutiranja, to je, da spremeni svojo strukturo. Zaradi te okužbe pobegne napad imunskega sistema in v večini primerov vodi v kronično vnetje v jetrih.

Glede na obstoj različnih podtipov virusa je treba izvesti izbiro zdravil ob upoštevanju rezultatov genotipizacije. Kljub dolgotrajni študiji bolezni in posebnosti strukture HCV ni bilo mogoče razviti specifičnega cepiva proti bolezni.

Težave zgodnje diagnoze so v asimptomatskem poteku hepatitisa, zaradi česar se oseba obrača na zdravnika na stopnji ciroze. Da bi pravočasno odkrili bolezen, so potrebni redni pregledi. Samo z laboratorijskim testiranjem krvi lahko prepoznate HCV in preprečite okužbo drugih. Dejstvo, da lahko nosilec okužbe dolgo časa ne ve za patologijo in še naprej prenaša virus zdravim ljudem.

Prenosne poti

Virus se v večini primerov širi skozi kri, saj vsebuje največjo koncentracijo patogenih učinkovin. Tako se okužba prenese:

• s hemodializo;
• pri trku z iglo;
• v času boja, ko je poškodovana koža in se pojavi hemokontakt;
• s transfuzijo krvi (transfuzija krvi).

Verjetnost okužbe z intimno intimnostjo je zanemarljiva, saj seme in izcedek iz nožnice vsebujeta majhno število patogenov. Tveganje okužbe se znatno poveča, če je celovitost sluznice genitalij ogrožena. To je opaziti z agresivnim in analnim seksom.

V zvezi z navpičnim načinom prenosa okužbe se izvaja v procesu dela. V obdobju brejosti patogen ne more prodreti v posteljico na zarodek. Pri naravni sorti se patogeno sredstvo prenese na otroka pri poškodbah kože, ko opazimo stik z materjo krvi.

Po penetraciji patogena v zdrav organizem se začne sinteza protiteles, ki je zaščita pred okužbo in pripada imunskim strukturam. Ugotovljene so med začetno študijo osebe s pomočjo ELISA.

Za potrditev diagnoze je bolnik podvržen polimerazni verižni reakciji. Gre za analizo za identifikacijo genetskega materiala patogenega sredstva in določitev virusnega bremena.

Laboratorijska diagnostika hepatitisa C

Laboratorijska diagnostika se začne z encimskim imunskim testom. Njena glavna naloga je odkrivanje protiteles proti patogenu. Njegova učinkovitost je skoraj 95%. Zahvaljujoč tej raziskavi na predklinični stopnji je mogoče prepoznati nosilca virusov in ga poslati v nadaljnjo preiskavo.

Kvalitativna analiza ELISA kaže na prisotnost ali odsotnost imunoglobulina v pacientovi krvi. Njegov rezultat je lahko "pozitiven" ali "negativen". Ko prejmete prvo varianto odgovora, oseba gre na naslednji izpit - PCR. Njena cena je odvisna od kakovosti reagentov in laboratorija. Stroški polimerazne verižne reakcije lahko dosežejo 4000 rubljev.

Značilnosti PCR

Z uporabo verižne reakcije s polimerazo, tudi majhno količino biološkega materiala za ovrednotenje virusa v krvi, to se pravi, da izračunamo koncentracijo patogenov v enem mililitru tekočine.

S pojavom PCR je bila diagnoza hepatitisa veliko preprostejša. Analiza omogoča identifikacijo HCV RNA, da ugotovi stopnjo nalezljivega procesa in infektivnost nosilca virusov.

Obstaja več vrst genetske diagnoze:

1. kvalitativna analiza PCR za hepatitis C - potrjuje prisotnost ali odsotnost HCV v krvi preiskovanca:
2. količinsko, zaradi česar je mogoče izračunati koncentracijo virusov in določiti stopnjo bolezni. Rezultat je podan v IU / ml ali kopijah / ml (odvisno od laboratorija);
3. genotipizacija je potrebna za določitev genotipa HCV. To je potrebno za natančen izbor zdravil, ki bodo v tem primeru najučinkovitejše. Analiza posredno kaže na resnost patološkega procesa v jetrih. Tako je v tretjini genotipa patogena najpogosteje opazili steatoze, v središču katere je kopičenje maščob v jetrnih celicah (njegove celice). Poleg tega vrsta virusa vpliva na rezultat in trajanje terapevtskega poteka.

Kvalitativna analiza PCR za hepatitis C

Prvi korak v laboratoriju je preučevanje biološkega materiala za prisotnost HCV RNA. Pomembno je vedeti, da ima kakovostna analiza za hepatitis C določeno stopnjo občutljivosti in zato ne more vedno dati pravega odgovora. V tem primeru je priporočljivo ponoviti laboratorijsko diagnozo z uporabo drugih reagentov.

Da bi dobili zanesljive rezultate, je treba uporabiti preskusni sistem z občutljivostjo najmanj 50 ie / ml.

Rezultat diagnoze je lahko "pozitiven" ali "negativen". Če patogena ne najdemo v krvi, se študija konča. Ko se v vzorcu odkrije patogeno sredstvo, se izvede kvantitativno število virusnega obremenitve.

Lažno negativen odgovor dobimo, ko je postopek prekinjen, na primer, v sredo padec aktivnih sestavin, ki zavirajo gradnjo kopije patogena. Tako ni mogoče prikazati prave slike krvi, zaradi česar ni diagnosticirane okužbe človeka.

Lažno pozitiven rezultat lahko dobimo, če je zbiralna cev za biološki material, pa tudi okolje za študijo, kontaminirana. Poleg tega je takšen odziv na analizo možen z mešano okužbo, če je na jetra prizadet več virusov, na primer hepatitis C in D.

Indikacije za kvalitativne raziskave

Zdravnik lahko dodeli kvalitativno študijo pacientu za odkrivanje RNA virusa hepatitisa C:

• ko prejmejo pozitiven ali vprašljiv odziv encimskega imunološkega testa;
• za preverjanje diagnoze;
• določanje virusne obremenitve;
• postavitev stadij bolezni;
• diagnoza mešane okužbe. Pogosto hepatitis C vpliva na jetra hkrati z virusom "D";
• določanje terapevtske taktike ob upoštevanju genotipa patogena;
• ocena dinamike sprememb v ozadju zdravljenja z protivirusnimi zdravili.

Prednosti polimerazne verižne reakcije vključujejo:

1. visoka občutljivost tehnike, ki omogoča ugotavljanje dejstva okužbe na predklinični stopnji;
2. identifikacija genskega materiala patogena in ne protiteles proti njej;
3. možnost vzpostavitve podtipa patogenega sredstva;
4. visoka hitrost diagnostike, saj ni nujno, da se sadite na hranljivem mediju, vendar je dovolj, da uporabite posebne testne sisteme. Oseba dobi rezultat po 5 urah;
5. univerzalnost. Analiza omogoča identifikacijo katerega koli genskega materiala (RNA, DNA). Zaradi tega lahko zdravnik potrdi hepatitis C in druge vrste bolezni (B);
6. možnost odkrivanja latentne okužbe.

Kvantitativne raziskave

V študiji krvi s polimerazno verižno reakcijo je mogoče izračunati število patogenov v določeni količini biološkega materiala. Indikator je prikazan v IE / ml. Zaradi analize je mogoče ugotoviti stopnjo infektivnosti bolnika, določiti stopnjo nalezljivega procesa in oceniti učinkovitost terapije z zdravili.

Na podlagi PCR strokovnjak odloči, kateri odmerki zdravil lahko blokirajo širjenje patogenov. Poleg tega se določi trajanje protivirusnega zdravljenja in prognoze za življenje. Pomembno je vedeti, da so testni sistemi zelo občutljivi, zato je metoda omogočila potrditev človeške okužbe tudi v predklinični fazi.

Genotipizacija

Zaradi zmožnosti povzročitelja mutacije, določanja taktike zdravljenja in izbire protivirusnih zdravil je potreben njegov genotip. Na primer, zdravljenje hepatitisa HCV 1 traja 48 tednov, pozitiven trend pa je opazen le v 60% primerov. Genotipi 2 in 3 imajo ugodnejšo prognozo. Protivirusna zdravila so predpisana za 8 mesecev, njihova učinkovitost pa dosega 85%.

Po statističnih podatkih je v večini primerov HCV 1, 2 in 3 registriran na območju Ruske federacije.

Pri dešifriranju laboratorijske študije lahko navedemo tak odgovor - "ni vnesen." To pomeni, da virus kroži v obtočnem sistemu pacienta, ki ga testni sistem ne more prepoznati. Rezultat analize v tem primeru kaže na okužbo osebe, ki je netipična za določeno geografsko območje povzročitelja.

Kako pridobiti zanesljive rezultate?

Za kvalitativno raziskavo PCR-ja pri odkrivanju RNA povzročitelja hepatitisa C so pokazali pravilne rezultate, zato je treba upoštevati zahteve za pripravo za laboratorijsko diagnostiko:

1. vzorčenje krvi se opravi na prazen želodec, "lačna" vrzel pa ne sme biti krajša od 8 ur;
2. dva dni pred študijem je priporočljivo prenehati pitje alkohola in zavrniti od ostrih, maščobnih in prekajenih jedi;
3. ukinejo uvajanje zdravil, ki zmanjšujejo strjevanje krvi, kot je heparin. Če so ta zdravila predpisana iz življenjskih razlogov, o tem obvestite zdravnika. Poleg tega se mora specialist zavedati sprejema drugih zdravil, ki lahko vplivajo na rezultat laboratorijskega testa;
4. Na predvečer zbirke biološkega materiala se fizioterapevtski postopki ne smejo izvajati in jih je treba izpostavljati močnemu fizičnemu naporu.

Na rezultate analize lahko vpliva ne le oseba, ki daje krv, ampak tudi drugi dejavniki, in sicer:

• slabo zbiranje krvi;
• neupoštevanje priporočil za prevoz biološkega materiala;
• nezadostno usposabljanje laboratorijskih delavcev;
• neupoštevanje raziskovalnih tehnik;
• uvedbo antikoagulantov (heparina) na predvečer vzorčenja krvi. Ta skupina zdravil zmanjšuje koagulabilnost in s tem upočasni delo reagentov.

V različnih laboratorijih je lahko diagnostični odziv nekoliko drugačen, vendar te napake ne vplivajo na končni rezultat študije.

Posebna pozornost se posveča vrsti preskusnih sistemov, ki se uporabljajo v laboratoriju. Pogosto se daje prednost reaktantom z visoko občutljivostjo. To je pomembno za bolnike z nizko virusno obremenitvijo, ker je težko zaznati.

Kako pogosto je opravljen laboratorijski test?

V prvi vrsti se polimerazna verižna reakcija izvaja pri ljudeh, ki so bili testirani na protitelesa proti virusu hepatitisa pri imunskem testu. V tem primeru je imenovan za potrditev dejstva okužbe osebe in ugotavljanje stopnje bolezni. Poleg tega vam analiza omogoča določitev podtipa virusa, kar je še posebej pomembno pri izbiri zdravil.

Naslednje obdobje za obvezno laboratorijsko testiranje je 3 mesece od začetka protivirusnega zdravljenja. Diagnoza ponuja priložnost za oceno učinkovitosti zdravil, prilagoditev odmerka ali njihovo zamenjavo.

Poleg osnovnih analiz se lahko PCR izvede tudi v 4 in 24 tednih od začetka zdravljenja. Pozitivno prognozo bolezni potrjuje zmanjšanje virusne obremenitve po treh mesecih zdravljenja. Tako se na primer zmanjša z 1 milijon ie / ml na več sto tisoč.

Če koncentracija patogenih učinkovin v krvi ostane na isti ravni ali nekoliko poveča, to kaže na neučinkovitost protivirusnih sredstev in zahteva njihovo zamenjavo. S pomočjo PCR ob koncu zdravljenja je mogoče potrditi bolnikovo okrevanje.

Za pravilno interpretacijo rezultatov laboratorijske diagnostike je potrebno posvetovanje s hepatologom ali specialistom za nalezljive bolezni. Glede na visoko incidenco lažnih odzivov na ELISA se analiza uporablja izključno za primarno presejanje. Za natančnejši pregled bolnika se uporablja verižna reakcija s polimerazo.

Ali še vedno mislite, da je težko ozdraviti hepatitis C?

Sodeč po dejstvu, da zdaj berete te vrstice - zmaga v boju proti bolezni jeter ni na vaši strani. In ste že razmišljali o terapiji z interferonom? Razumljivo je, ker je hepatitis C zelo resna bolezen, ker je pravilno delovanje jeter zagotovilo zdravja in dobrega počutja. Slabost in bruhanje, rumenkast ali sivkast ton kože, grenkoba v ustih, zatemnjenje urina in diareje. Vsi ti simptomi vam niso seznanjeni z glasovi.

Ampak morda je pravilneje, da ni posledica, temveč razlog? Za zdravljenje priporočamo uporabo sodobnih ruskih zdravil - sophosbuvir in daklatasvir. Preberite več >>

Kaj je RNA virusa hepatitisa C?

Študija RNA virusa hepatitisa C je najpomembnejši postopek, ki omogoča natančno določanje trajanja in metod zdravljenja bolnikov. Diagnoza bolezni je sestavljena iz več različnih krvnih preiskav, kot so:

• označevalci hepatitisa C (anti-HCV);
• odkrivanje RNA virusa hepatitisa C (HCV RNA).

Prva študija se opravi s prvim suma hepatitisa. Druga možnost je najpomembnejša pri zdravljenju HCV RNA, zato jo podrobneje preučite.

Kaj je virusni hepatitis C?

Virusni hepatitis C ali HCV je nalezljiva bolezen, ki prizadene jetra. Okužba z virusom se pojavi skozi kri. Lahko se okužite s transfuzijo krvi, če se ne upoštevajo pravila za sterilizacijo medicinskih pripomočkov. Obstaja manj primerov, ko se bolezen pridobi spolno ali od noseče matere do ploda. Hepatitis C je 2 vrst.

Kronični hepatitis C je najbolj nevaren. To je oblika bolezni, ki lahko traja celo življenje. To povzroča resne težave pri delovanju jeter, kot so ciroza ali rak. V 70-90% okuženih ljudi bolezen preide v kronično fazo.

Najpomembnejša nevarnost hepatitisa C je, da poteka tajno, brez ikteričnih znakov. V tem primeru se najpogosteje pritožujejo zaradi zvišane telesne temperature, slabosti in bruhanja, fizične šibkosti, večje utrujenosti, izgube apetita in telesne teže. V tem primeru se v ozadju majhnega zbijanja jetrnih tkiv pogosto dogaja njegova maligna degeneracija. Zaradi tega se virusni hepatitis C pogosto imenuje "časovna bomba" ali "ljubeči morilec".

Še ena posebnost bolezni je zelo počasen razvoj, ocenjen v več desetletjih.

Okuženi praviloma praviloma ne počutijo nobenih simptomov in ne sumijo na njihovo resnično stanje. Pogosto se bolezen lahko identificira samo, če se nanaša na zdravnika o drugi zadevi.

Skupina tveganj vključuje:

• otroci, ki so prejeli virus hepatitisa C od mater;
• odvisniki od drog;
• ljudje, ki so prebodili dele telesa ali tattoo-ji nesterilno orodje;
• prejel krvno donacijo ali organe (do leta 1992, ko hemodializa ni bila opravljena);
• ljudi, okuženih z virusom HIV;
• Zdravstveni delavci v stiku z okuženimi bolniki.

Določanje hepatitisa C RNA

Določanje virusa hepatitisa C RNA, imenovana tudi hepatitisa C PCR, te študije biološkega materiala (v krvi), s katero se lahko identificira v telesu neposreden dostop virusa genomateriala hepatitisa B (posamezni virus enojna delec RNA).

Glavna testna metoda je PCR ali polimerazna veriga reakcijska metoda.

Za določanje HCV RNA obstajata dve vrsti krvnih preiskav:

Preskus kakovosti

Pri izvajanju kvalitativne analize je mogoče ugotoviti, ali je virus v krvi. Vsi bolniki, ki imajo protitelesa proti C-hepatitisu, morajo opraviti ta test. Po svojih rezultatih lahko dobite dva odgovora: "prisotni" ali "manjkajo" virus. Na pozitivnem rezultatu testa (najdemo) je mogoče oceniti aktivno množenje virusa, ki okuži zdrave celice v jetrih.

Preskus, izveden za visoko kakovostno PCR, je prilagojen na specifično občutljivost, od 10 do 500 IU / ml. Če se v krvi odkrije virus hepatitisa s specifično vsebnostjo manj kot 10 ie / ml, lahko odkrivanje virusa postane nemogoče. Med bolniki, za katere je predpisana protivirusna terapija, opazimo zelo nizko vrednost specifične vsebine virusa. Zato je pomembno, da je občutljivost medicinskega sistema visoka za diagnosticiranje in določanje kvalitativnega rezultata v polimerazni verižni reakciji.

Pogosto se polimerazna verižna reakcija C-hepatitisa izvede takoj po odkritju ustreznih protiteles. Kasnejši testi, ko prehajajo protivirusno zdravljenje, potekajo v 4., 12. in 24. tednu. In še ena analiza po prenehanju PVT se naredi po 24 tednih. Potem - enkrat na leto.

Kvantitativni test

Kvantitativna analiza PCR RNA, včasih imenovana virusna obremenitev, določa koncentracijo (specifično vsebino) virusa v krvi. Z drugimi besedami, virusna obremenitev je opredeljena kot določena količina virusne RNK, ki je lahko v določeni količini krvi (običajno je uporabiti 1 ml, enako 1 cm v kocki). Enote za rezultate preskusa so mednarodne (standardne) enote, deljene z enim mililitrom (ie / ml). Vsebina virusa se včasih pojavi drugače, odvisno od laboratorijev, v katerih poteka raziskava. Pri hepatitisu C količinska opredelitev včasih uporablja vrednosti, kot so kopije / ml.

Treba je razumeti, da ni specifične odvisnosti od resnosti C-hepatitisa na koncentraciji tega seva v krvi.

Preverjanje "virusne obremenitve" vam omogoča, da določite stopnjo nalezljivosti bolezni. Torej se tveganje za okužbo z virusom druge osebe poveča s povečanjem koncentracije hepatitisa v krvi. Poleg tega visoka vsebnost virusa zmanjša učinek zdravljenja. Zato je majhna virusna obremenitev zelo ugoden dejavnik za uspešno zdravljenje.

Poleg tega ima test za hepatitis C in njegovo določanje s PCR pomembno vlogo pri uporabi terapije proti bolezni in določanju uspeha zdravljenja. Na podlagi rezultatov testa je načrtovan sanacijski program. Na primer s prepočasnim zmanjšanjem specifične koncentracije virusa hepatitisa se podaljša protivirusna terapija in obratno.

V sodobni medicini se domneva, da je obremenitev več kot 800.000 ME / ml. Obremenitev presega 10000000 ME / ml, se šteje za kritično. Toda strokovnjaki iz različnih držav in do danes niso imeli enakega mnenja o mejah virusnega bremena.

Pogostost kvantitativnega testa

Na splošno je kvantitativna analiza za hepatitis opravljena pred antivirusno terapijo in 3 mesece po koncu zdravljenja za določitev kakovosti terapije.

Kot rezultat kvantitativnega preskusa se šteje kvantitativno vrednotenje rezultatov zgoraj navedenega vzorca. Posledično bo izrečena sodba "pod izmerjenim območjem" ali "v krvi ne bo zaznana".

Parameter občutljivosti kvalitativnega testa je običajno nižji od občutljivosti kvantitativne analize. Prepis "Manjka" kaže, da obe vrsti analiz niso našli RNK virusa. S preskusom "pod izmerjenim obsegom" kvantitativna analiza verjetno ni našla hepatitis RNA, čeprav to potrjuje prisotnost virusa z zelo majhno specifično vsebino.

Hepatitis C in njegovi genotipi

Genotipizacijo virusa hepatitisa C RNA diagnozo prisotnost različnih genetskih vrst hepatitisa C. znanost pozna več kot 10 vrst virusnega genoma, toda za medicinski praksi dovolj razlikuje več genotipov, ki imajo največji delež v regiji. Določanje genetski tip igra ključno vlogo pri izbiri čas zdravljenja, ki je nujna, če želimo upoštevati širok spekter stranskih učinkov zdravil proti hepatitisu.

Metode zdravljenja virusnega hepatitisa C

Edini učinkovit način zdravljenja virusa hepatitisa je praviloma kombinacija dveh zdravil: interferona-alfa skupaj z ribavirinom. Ločeno, ta zdravila niso tako učinkovita. Priporočeni odmerek zdravil in čas uporabe morajo predpisati le zdravnik in posamezno vsakemu bolniku. Zdravljenje s temi zdravili lahko traja 6 do 12 mesecev.

Danes droge niso izumili, ki zagotavljajo 100% okrevanje od virusa. Vendar pa lahko z ustrezno izbranim zdravljenjem zdravljenje bolnikov doseže do 90% števila primerov.

Virus hepatitisa s kvalitativno definicijo RNA

"Odkrivanje genov virusa hepatitisa C (HVC) v pacientovi krvi je druga stopnja laboratorijske diagnostike te infekcijske patologije. Za odkrivanje sredstva, ki nima celične membrane in s tem površinskih antigenov, se uporablja polimerazna veriga reakcijska metoda. S pomočjo te metode je neposredno molekula, v kateri so kodirane vse njegove genske informacije - RNA.

RNA - Ribonukleinska kislina skupaj z DNA je del celic vseh živih organizmov. Virus hepatitisa C vsebuje molekulo RNK in ima sposobnost mutiranja.

Študijo prisotnosti gena HVC se običajno dajejo po opravljenem splošnem, biokemičnem krvnem testu in pridobljenem pozitivnem protitelesnem odzivu (anti-HVC).

Kaj to pomeni?

Preskus za protitelesa proti HVC je presejalni pregled, torej ga je mogoče uporabiti za preučevanje velikih populacij ljudi (zdravniki, nosečnice, bolnišnice, donatorji, uporabniki injicirajočih drog in okuženi z virusom HIV). Negativen rezultat laboratorijske analize anti-HVC kaže, da v krvi subjekta ni imunskega odziva na virus. V takšnih primerih je mogoče dobiti negativen rezultat:

Če oseba ni bila okužena s hepatitisom C.

Če je občutljivost laboratorijskega testnega sistema nižja od koncentracije proti HVC.

Če se je okužba zgodila pred manj kot 2 meseci, anti-HVC v krvi še vedno ni dovolj za določitev. Z lažno negativnim odzivom zaradi človeškega dejavnika.

Če se dobi rezultat, da se odkrijejo protitelesa proti HVC pri bolniku, to pomeni, da je bil virus hepatitisa C v času študije v telesu subjekta ali je bil v krvi pred časom. S pozitivnim rezultatom na anti-HVC postane potrebno opraviti dodatne laboratorijske teste, ki zaznajo genetski material samega patogena, določajo koncentracijo njegovih genov (virusno obremenitev, viremijo) in določijo genotip.

Analiza za RNA virusa hepatitisa C

Genom HVC v laboratoriju je mogoče zaznati z uporabo več študij:

razvejana DNA (p-DNA);

transkripcijsko ojačanje (TMA);

polimerazna verižna reakcija (PCR).

Metoda p-DNA je poceni in enostavna metoda za odkrivanje virusnega genoma pri velikem številu anketiranih. Njegova glavna pomanjkljivost je nizka občutljivost: zaznava HVC samo pri koncentraciji nad 500 IU / ml.

Metoda transkripcijske ojačitve zazna nukleinske kisline virusa v serumu v krvi. Analiza ima visoko občutljivost (5-10 IU / ml), vendar še ni bila v zadostni meri uvedena v splošno razširjeno laboratorijsko prakso.

Metoda PCR v Rusiji je najpogostejša in dostopna laboratorijska preiskava z visoko občutljivostjo (od 50-60 IU / ml).

Test PCR se izvaja v katerem koli kliničnem laboratoriju, ki ima ustrezno akreditacijo. Zelo pomemben odtenek te diagnostične metode, ki vpliva na rezultat analize, je občutljivost testnega sistema, uporabljenega v laboratoriju. Na primer občutljivost diagnosticuma 60 ie / ml, kot v laboratorijih Invitro, vam omogoča, da odkrije virusno RNA 3 mesece po okužbi. Pri nizki občutljivosti testnega sistema geni patogena ni mogoče zaznati niti po 4 mesecih po okužbi.

RNA virusa hepatitisa C: metoda PCR

Metoda PCR ima veliko prednosti pred drugimi laboratorijskimi testi za odkrivanje genov HVC:

visoka občutljivost. Metoda omogoča določanje genskega materiala patogena tudi pri najmanjši koncentraciji v vzorcu;

večja specifičnost. Identificira gene virusa določenega genotipa med različnimi DNK in RNK drugih patogenov, ki omogočajo genotipizacijo patogena;

izvajanje hitrosti. Odsotnost dolgega procesa gojenja patogena zmanjšuje čas dobivanja rezultata do nekaj ur; univerzalnost analize.

Univerzalni postopek za študijo omogoča hkratno uporabo enega vzorca človeške krvi za odkrivanje genetskega materiala različnih patogenov. Te prednosti omogočajo, da se PCR šteje za "zlati standard" laboratorijske diagnostike viralnega hepatitisa C skupaj z encimskim imunskim testom za anti-HVC.

PCR je študija, ki se uporablja za določanje genov HVC v krvi osebe, ki se preiskuje. Študija je sestavljena iz več faz:

Vzorčenje biomateriala.

Povečajte povečanje koncentracije kopij RNK v izbranem vzorcu.

Odkrivanje genskega materiala s pomočjo posebnih testnih sistemov.

Po vzorčenju venske krvi se bolnik podvrže umetnemu začetku postopka večkratne replikacije (ojačanje, kopiranje) genov HVC.

V ta namen se temperatura znotraj preskusne cevi z biomaterialom večkrat spreminja na določen način. Ko število kopij RNA v cevi doseže zahtevano vrednost, se patogen odkrije s pomočjo posebnih test-diagnosticumov.

kakovost (ugotovi prisotnost virusa),

kvantitativno (določa koncentracijo virusnih genov na enoto prostornine)

genotip (ugotovi genotip patogena).

RNA hepatitisa C: kvalitativna analiza

Naloga kakovostnega PCR je ugotoviti prisotnost HVC v predstavljenem biomaterialu. Ta študija se običajno izvaja za pregled diagnoze bolezni ali identifikacije nosilca. Določite ga, ko jih ELISA odkrije z anti-HVC.

Za diagnosticiranje hepatitisa C je dovolj, da se kvalitativno identificira genetski material HCV, to je, ne da bi se upošteval njegova koncentracija v volumnu krvi. Rezultat kvalitativnega PCR je lahko: "zaznana RNA" ali "RNA ni zaznana".

Natančnost metode ustreza 95%. Hkrati natančnost test-diagnosticumov samega doseže 100% in 5% je človeški faktor, ki je vedno prisoten v laboratorijskih študijah. Da bi se izognili lažnim negativnim analizam, zlasti pri ljudeh z nizko viremijo, je potrebna visoka občutljivost diagnostičnega sistema, uporabljenega v študiji. Občutljivost preskusnega sistema ne sme biti manjša od 60 ie / ml.

RNA hepatitisa C: kvantitativna analiza

Kvantitativna analiza je predpisana, kadar je potrebno poznati raven viremije v človeškem telesu. Indikacije za to študijo so:

pozitiven rezultat kakovostnega PCR, če so odkrili protitelesa proti virusu;

vzpostavitev stopnje patologije;

opredelitev virusnega bremena pri hepatitisu;

izbira kombinacije protivirusnih zdravil;

Spremljanje virusnega odziva na tekoče protivirusno zdravljenje;

ocena verjetnosti prehoda akutnega hepatitisa C na kronično.

Rezultat analize je izražen v IU / ml (mednarodne enote v 1 ml seruma) ali v kopijah / ml (število kopij genov virusa v 1 ml seruma). Kvantitativni PCR nima norme: običajno gen HVC v človeški krvi ne bi smeli zaznati. Rezultati raziskave se primerjajo z referenčnimi vrednostmi, določenimi za določeno stopnjo virusnega bremena.

Torej, kazalci (v IU / ml):

pod 4 × 10 * 5 velja za nizko viremijo;

od 4 × 10 * 5 do 8 × 10 * 5 - srednje;

več kot 8 × 10 * 5 - visoka.

Več kopij virusne RNK v krvi, bolj agresivna bolezen in večje tveganje prenosa virusa na druge. Ampak raven virusne obremenitve ni edini kazalnik, ki vpliva na resnost poteka patologije in nadaljnjo napoved bolnika: genotip patogena je prav tako pomemben.

Vzpostavitev genotipa je potrebna za določitev pravilnega režima zdravljenja. Določa tudi prognozo bolnikovega zdravja in življenja. Na primer, virus 3 genotipa pogosto vodi do fibroze ali ciroze jeter, v primerjavi s pacienti, ki imajo 1 genotip.

Hepatitis C: analiza in interpretacija

RNA Diagnoza hepatitisa C ni mogoča samo na podlagi kvalitativnega in / ali kvantitativnega PCR: določitev HVC in raven virusne obremenitve ni dovolj za predpisovanje ustrezne protivirusne terapije. Potencialni bolnik je treba celovito preučiti (klinično, laboratorijsko, instrumentalno), da bi imeli objektivno sliko patologije. Pravilno določiti kompleks preizkusov za vzpostavitev diagnoze hepatitisa C in nato pravilno razlagati rezultate lahko samo zdravnik.