Laboratorijska diagnostika viralnega hepatitisa C, B, A

Share Tweet Pin it

Virusni hepatitis je nalezljiva vnetna bolezen jeter, najpogostejša patologija med drugimi jetrnimi lezijami. Diagnoza bolezni temelji na kliničnih simptomih in laboratorijskih testih, odvisno od vrste virusnega hepatitisa. Pomembno vlogo igrajo skrbno raziskana medicinska zgodovina in epidemiološka zgodovina. Obstaja več oblik virusnega hepatitisa, pri čemer se upoštevajo različne patogene, klinične manifestacije, potek in resnost bolezni. Laboratorijska diagnoza viralnega hepatitisa je v mnogih primerih edina metoda, ki vam omogoča natančno ugotavljanje bolezni. Trenutno so odkrili in proučevali več vrst virusov s hepatotropnim delovanjem (A, B, C, D, E), kar povzroči podobno klinično sliko. Zaradi nizke stopnje in težke diagnoze hepatitisa C se smatra, da je najtežje od vseh znanih vrst.

Virusni hepatitis A

Ima fekalno-oralni način prenosa, zaradi česar je razširjena okužba. Diagnoza hepatitisa A ni zelo težka. Inkubacijsko obdobje je relativno kratko - od 7 do 50 dni; za katero je značilen oster začetek: obstaja visoka vročina, izrazit astenični sindrom, bolečina v vseh sklepih - klinično spominja na gripo. Trajanje bolezni - 1 mesec. Blagi potek bolezni včasih ne zahteva posebnih terapevtskih ukrepov, obstajajo primeri samozdravljenja.

Virusni hepatitis B

Za subklinične laboratorijsko diagnostiko hepatitisa B, je edina natančna metoda za preverjanje diagnozo - definiran antigena v krvi in ​​protitelo proti proteinu patogena, kot tudi HBV DNA. Prenosne poti:

  • parenteralno - skozi kri;
  • spolno - skozi spermo;
  • vertikalno: od matere do ploda (prek materinega mleka se virus ne prenese na otroka).

Infekcija zaužije ob uporabi umazanih igel (eno iglo odvisnikov uporabo) preko orodja (pri kirurških posegih, tetoviranje, akupunkture, uho prebadanjem, manikura, pedikura), pri transfuziji krvi. Skrito obdobje traja od 2 mesecev do 6 mesecev. Simptomi so podobni pojavu viralnega hepatitisa A: pojavijo se gripi podobni sindrom, v celotnem telesu in v sklepih se pojavijo bolečine, huda šibkost, slabo počutje. Včasih so izpuščaji. Napoved akutnega hepatitisa je razmeroma ugodna: v 80% primerih pride do okrevanja. Subklinična oblika bolezni pogosto pridobi kronično pot - v takšnih primerih je v celoti mogoče doseči popolno zdravljenje.

Hkrati je v mnogih primerih bolezni, satelita hepatitisa B, virus D (delta), ki povzroča virusni hepatitis D, in poslabša potek osnovne bolezni.

Virusni hepatitis E na kliničnih simptomah spominja na HAV, vendar ima postopen začetek in je za nosečnice veliko bolj nevaren.

Manifestacije HCV

Laboratorijska diagnoza hepatitisa C (HCV) v laboratoriju je še posebej pomembna, saj prizadene približno 3% svetovnega prebivalstva. Vsako leto se pojavnost poveča - to je povezano s stalnim povečevanjem odvisnosti od drog v svetu.

Pozor, prosim! Virusni hepatitis C je eden od najbolj nevarnih in hudih med znanimi oblikami nalezljive okvare jeter. Imenovan je "nežni morilec" zaradi subkliničnega pretoka za dolgo časa, nato pa hiter izid pri cirozi z možnim smrtnim izidom. Kombinacija HCV z drugimi oblikami nalezljivega hepatitisa znatno povečuje potek bolezni in pospešuje smrtonosni izid.

Akutni HCV je asimptomatičen, zato ga redko diagnosticirate. Če je mogoče v tej fazi prepoznati bolezen, lahko s pravočasnim začetkom zdravljenja v 20% pride do okrevanja.

HCV se najpogosteje opazi v kronični obliki v poznih fazah. Kronizacija postopka se pojavi v 50% primerov.

S asimptomatskim prenosom virusa C se jetrne celice postopoma poškodujejo, razvije se fibroza. V prihodnosti, če ni pravočasnega zdravljenja, se poveča nevarnost ciroze ali jetrnega raka.

Diagnoza viralnega hepatitisa v vseh njenih oblikah temelji na opredelitvi:

  • patogen in njegovo replikacijo;
  • označevalci okužbe.

Diagnostične metode vključujejo imunokemične in molekularno-biološke reakcije, ki kažejo:

  • antigeni patogena;
  • protitelesa proti virusu;
  • nukleinske kisline.

Struktura virusa C

Virus C (BC) ima v svoji genomi enonivojno RNA. On je edini med povzročitelji virusnega hepatitisa, ki ima takšno strukturo. Tako nosilec kot bolnik ne morejo uganiti o virusu, ki ga imajo. Zato je za odkrivanje patologije z nejasno diagnozo potrebnih več študij in diagnostičnih testov.

Genom virusa C (njegova RNA) je sestavljen iz 10.000 nukleotidnih baz. Tako visoka heterogenost določa značilnosti HCV. Pri proučevanju nukleotidov RNK so bile razkrite pomembne razlike v njihovi strukturi. Ob upoštevanju razkritih strukturnih značilnosti je bila razvita klasifikacija HCV, po kateri:

  • možnosti (jih je 6 - 9);
  • podtipov;
  • genotipov.

Nekatere so v vseh državah brez izjeme, nekateri - lokalno v nekaterih regijah. Po prodoru v telo se virus C vstavi v verigo nukleotidov molekule RNK. Nenehno mutira (mutira) in oseba postane nosilec 50 podtipov istega genotipa virusa. Imunski sistem ne spremlja hitre mutacije: protitelesa proizvajajo za eno skupino virusa, bolezen postane kronična.

Opredelitev virusa C

Diagnoza HCV je postala resničnost s pojavom molekularne biologije. To je razloženo z izredno nizko vsebnostjo virusa v krvi, ki ne omogoča izoliranja antigenov s prejšnjimi metodami.

Kadar obstaja sum na HCV, je laboratorijska diagnoza namenjena določanju:

  • protitelesa (Ig G, Ig M) z ELISA (encimski imunski test);
  • RNA virus z uporabo PCR (polimerazne verižne reakcije).

Pozor, prosim! Serološki označevalci hepatitisa C so RNA-HCV in protitelesa, ki se tvorijo v telesu.

PCR - opredelitev virusa hepatitisa C.

RNA - HCV spada v zgodnjih označevalcev HCV: njegov nastop v krvi pojavi pri 10 - 12 dni po okužbi, torej veliko prej povečala aminotransferaze (AST, ALT, GGT)... Odkrivanje RNA-HCV označuje aktivno replikacijo (množenje) virusa. To je "zlati standard" diagnoze, saj pojasnjuje in potrjuje diagnozo tudi v času, ko so simptomi bolezni praktično odsotni. PCR je treba izvesti za spremljanje rezultatov ELISA. Izvaja se v kvalitativnih in kvantitativnih variantah.

Virusna obremenitev je visoka pri PCR> 800 tisoč ie / ml ali 2 milijona kopij / ml; nizka - s PCR

Pozor, prosim! PCR ni samo kvalitativna analiza (odkrivanje virusa RNA), ampak tudi določa število kopij RNK v 1 ml krvi. To ima pomembno vlogo pri imenovanju učinkovitega zdravljenja in vrednotenju uspeha pri zdravljenju. Če je RNA virusa C odkrita v krvni plazmi, to kaže na akutno fazo bolezni. Obseg okvare jeter in širjenje patoloških sprememb - fibroza in vnetje - se pokaže po biopsiji. Ta metoda je najbolj informativna in zanesljiva pri diagnostiki. Manipulacija je popolnoma neškodljiva za pacienta in traja nekaj sekund.

ELISA - odkrivanje protiteles proti virusu

Človeški imunski sistem proizvaja protitelesa (Ig G, Ig M) proti patogenu, ko vstopi katerikoli infektivni agent. Oblikovani imunoglobulini ustvarjajo močan kompleks s tujimi beljakovinami (z antigenom virusa), katerih količinski in kvalitativni parametri se določijo med ELISA. Nanaša se na posreden način preizkusa: med preiskavo virus ni zaznan, vendar se pojavi imunski odziv organizma na nalezljivega povzročitelja. ELISA se izvaja za zgodnjo diagnozo in spremlja proces v dinamiki.

Protitelesa se odkrijejo pri 80% okuženih le do 5-6 tednov po pojavu bolezni, v 90% - za 12 tednov. Včasih ti preskusi dajejo lažne pozitivne odgovore. V takšnih primerih obstajajo posebni testi - spekter protitelesnih proteinov se določi z metodo rekombinantnega imunoblotiranja.

Da bi dosegli zanesljive rezultate, se testi PCR in ELISA izvedeta dvakrat z določenim časom. Običajno je časovno obdobje 6 mesecev.

Taktika opazovanja

Da bi določili taktiko zdravljenja za razjasnitev aktivnosti procesa v jetrih, se določijo jetrni testi:

  • transaminaze krvi (ALT, AST, GGT);
  • celotni bilirubin in njegove frakcije;
  • alkalna fosfataza (AFP);
  • skupni proteini z frakcijami.

Glede na rezultate laboratorijskih raziskav se uporabljajo različne taktike upravljanja s pacienti:

  • Pri normalnih številkah je bolnik pod nadzorom zdravnika. S spremembo zdravja se preskusi ponovijo.
  • S povečanjem 2 ali večkrat, se ELISA izvaja na anti-HCV.
  • Če je imunski test encimov pozitiven, se uporabi PCR-polimerazna verižna reakcija, kar ima za posledico izbor protivirusnega zdravljenja.
  • Pri povišani 2-krat ali več kazalniki vzorcih jeter, toda negativno ELISA ali s povečanjem jetrnih vzorcev 2-krat, pozitivni IFA in PCR negativne dinamični nadzor nadaljuje s pregledom in kontrolo krvi biokemičnih testih 1 vsake 3 mesece.
  • Pri visokih biokemičnih parametrih se s klinično diagnozo izvedejo pozitivni rezultati ELISA in PCR, izbere se protivirusno zdravilo in zdravljenje nadzira.

Raziskave biokemičnih kazalcev

Na podlagi rezultatov biokemičnega testa krvi je ocenjena raven aminotransferaz.

  • ALT - alanin aminotransferaza - je del hepatocitov. Tudi rahlega presežka norme kaže na obstoječi hepatitis (vključno z virusnim) v zgodnjih fazah.
  • AST - aspartat aminotransferaza: če njegova raven presega ALT, je indikator začetne fibroze (proliferacija vezivnega tkiva).

Visoke vrednosti ALT, AST v krvi so posledica nekroze jetrne celice. So posredni indikator aktivnosti vnetnega procesa. Če ravni ALT več kot 3 krat pravilo, govorimo o minimalni aktivnost, 3 - 10-krat -umerennaya vnetna Postopek aktivnost, več kot 10-krat - hepatitisa z visoko aktivnostjo.

Stopnja AST se spremeni in z drugimi patologijami, ALT velja za bolj specifične za bolezni jeter.

  • Zvišanje ravni celotnega in neposrednega bilirubina se pojavi s povečanim izobraževanjem ali z odloženim izločanjem iz telesa. Virusni hepatitis se pojavlja s kršenjem izločanja bilirubina. Žolčnika in sklero sluznice opazimo pri koncentracijah bilirubina nad 30-35 mmol / l, z nadaljnjim kopičenjem rumene kože. Pri kronični poti se to ne zgodi.
  • Za sindrom je značilno povečanje alkalne fosfataze (AFP), gama-glutamintransferaze (GGT), holesterola in žolčnih kislin. Toda bolezen jeter ni edini razlog za njihovo povečanje.
  • Povečanje albumina je povezano z okvarjenim delovanjem jeter.

Klinična diagnoza

V korist virusnega hepatitisa C je indicirano s kliničnimi manifestacijami. Kronična seveda značilna pičlimi simptomi: moteno slabo počutje in večjo utrujenost proti koncu dneva, zmanjšana odpornost na običajno fizično aktivnostjo. Pri normalnih biokemičnih analizah so takšni klinični znaki redko povezani z virusnim hepatitisom. Razgrniti klinična slika pojavi v kasnejših fazah: tam telangiektazije in jeter "zvezde", Bolezni jeter - in splenomegalija, zlatenica od beločnice, kožo in sluznico v ustih, srbenje kože (z zelo visoko raven bilirubina v krvi), temen urin, spremenjene blata, krvavitev, izguba teže, jetrne palme.

Pozor, prosim! V prisotnosti kronične HCV lahko tvorita z veliko verjetnostjo razvoj raka na jetrih, zato je potrebno v rednih časovnih intervalov (1, vsakih šest mesecev) za preiskavo krvi za tumorskih označevalcev in alfa - fetoproteinom.

Ultrazvočni pregled

Poleg laboratorijskih metod obstajajo tudi dodatni raziskovalni postopki, ki igrajo pomembno vlogo pri diagnozi HCV. Ti vključujejo ultrazvočne preiskave. S to metodo pregleda se preučuje stanje trebušnih organov. Ugotovijo se velikost, gostota, struktura, lokacija organov, razkrivajo se obsežne formacije, konkrementi, krvavitev izliva žolča, velikost portala in venine vranice. Splenomegalija, hepatomegalija, povečanje portalne vene kažejo na hepatitis s prehodom na cirozo. Nadaljnji pregled je serodiagnoza potrebna za izključitev ali potrditev virusnega hepatitisa C.

Fibrosanning in drugi testi

Metoda posredne diagnoze, ekvivalent biopsije - fibroskopiranje (elastometrija): neinvazivno, varno, se lahko večkrat izvaja za nadzorovanje terapije. Indikacije za izvedbo elastometrije so sumljivi na patološke procese v jetrih, vključno s prisotnostjo virusa.

Obstaja tudi veliko diagnostičnih testov, ki so alternativa biopsiji jeter. Preizkusi omogočajo natančno določitev morfološke slike prizadetega organa, obstoječe fibroze, steatoze, nekroze ali vnetja. Nekatere od njih:

  • FibroTest - s svojo pomočjo, celovito analizo 5 biokemičnih kazalcev in pravočasno diagnozo stopenj fibroze.
  • ActiTest - določa 6 biokemičnih indikatorjev in omogoča diagnosticiranje nekroze vnetnega procesa v jetrih.

Pozor, prosim! Napoved HCV je odvisna od pravočasne diagnoze, stopnje okužbe in pacientove želje po zdravljenju. Sodobne terapevtske metode z uporabo protivirusnih zdravil omogočajo zdravljenje bolezni ali doseganje dolgoročne remisije, podaljšanje življenjske dobe in izboljšanje njegove kakovosti pri okuženi osebi ali nosilcu. Virusni hepatitis C, kljub težki diagnozi in podaljšanem zdravljenju, ni razsodba. Nujno se pravočasno obrne na zdravnika, da dobi visoko kakovostno zdravstveno oskrbo in skrbno izpolni vse svoje potrebe.

Diagnoza hepatitisa B in hepatitisa C. Pregled

Hepatitis je običajno ime vnetnih procesov jeter. Najpogosteje hepatitis povzroča viruse hepatitisa B in hepatitisa C. Med okužbo, tetovažami, manikuro, intravensko injekcijo zdravil je mogoče okužiti. Pri zobozdravniku obstaja velika nevarnost okužbe, s kirurškimi operacijami, transfuzijo krvi. Hepatitis B se prenaša spolno in od matere do otroka med nosečnostjo (tveganje je približno 30-40%). Za hepatitis C takšna prenosna pot ni pomembna.

Simptomi virusnega hepatitisa B in hepatitisa C so podobni.

Klinična slika se razlikuje v akutnih in kroničnih oblikah.

Akutni virusni hepatitis je vnetni proces v jetrnem tkivu, ki ga povzroča nedavna (manj kot 6 mesecev) okužba. Kronični virusni hepatitis je vnetje v obliki jeter in distrofija z blago fibrozo, ki traja več kot 6 mesecev.

Simptomatologija viralnega hepatitisa je posledica zastrupitve zaradi krčenja detoksikacijske funkcije jeter in holestaze (krvavitev odtekanja žolča). Najprej obstaja cerebro-toksičen učinek, ki vodi do povečane utrujenosti, motenj spanja (pri blagih oblikah akutnega hepatitisa in kroničnega hepatitisa).

V primeru akutne bolezni začetno obdobje traja približno 2-3 tedne. To spremljajo bolečine, slabost, prebavne motnje (slabost, bruhanje, izguba apetita), vročina, zlasti pogosti pri virusnem hepatitisu B. holestaze zaradi tudi značilnost hepatitisa B. Ta spremeni barvo urina (temno) in blata (osvetli ). Pogosto je akutna oblika na splošno asimptomatska, še posebej pri hepatitisu C.
Akutni virusni hepatitis B se v 80% primerov konča z okrevanjem, v 20% - gre v kronično obliko. Pri hepatitisu C se pri približno 90% odraslih bolnikov in pri 20% otrok razvije kronični tečaj. Kronična oblika predstavlja največjo nevarnost, saj se pogosto spreminja v cirozo jeter.

Pri nezdravljenih bolnikih z depresijo in utrujenost lahko edino manifestacije virusnega hepatitisa pred diagnozo. V kasnejših stopnjah kroničnega hepatitisa z obsežnimi fibroza in cirozo sindroma ospredju portalne hipertenzije, ki je življenjsko nevaren posledica nabiranja tekočine v trebuhu (ascites) in morebitne notranje krvavitve.

Prvi nastop je značilno za hepatitis simptomov je treba opraviti diagnostično testiranje za virus hepatitisa B (B) in C. Glede na dejstvo, da je mogoče asimptomatski potek bolezni, kot tudi enostavnost okužbe za pregledovanje HBV treba redno storiti, vendar od virusnega hepatitisa B storiti Inokulacija.

Metode, ki se uporabljajo za odkrivanje okužbe s hepatitisom C.

Najtežja oblika virusnega hepatitisa je hepatitis C. Le za ta virus je prisotnost RNA v njegovi sestavi. V primeru povečane aktivnosti jetrnih encimov se pojavlja sum na penetracijo in širjenje virusa v telesu. Dodaten dejavnik, ki kaže na potrebo po diagnozi, je pripadnost morebitnega nosilca tvegani skupini.

Svetovanje pri hepatologih

V letu 2012 je prišlo do preboj v zdravljenju hepatitisa C. Razvili so se novi protivirusni zdravili z direktnim delovanjem, ki z verjetnostjo 97% popolnoma olajšajo bolezen. Od takrat se hepatitis C uradno šteje za polno zdravilno bolezen v medicinski skupnosti. V Ruski federaciji in državah CIS so droge predstavljene blagovne znamke cofosbuvir, daklataswir in lepidasvir. V tem trenutku se je na trgu pojavilo veliko ponaredkov. Zdravila ustrezne kakovosti lahko kupite le pri podjetjih, ki imajo licenco in ustrezno dokumentacijo.
Pojdite na spletno mesto uradnega dobavitelja >>

V večini primerov bolezen prehaja brez posebnih znakov in nosilec morda ne ve, da je njegovo telo okuženo s HCV. Da bi odkrili bolezen, je treba izvesti vrsto študij in testov.

Če so rezultati takšnih analiz dvomljivi, lahko specialist predpiše ponoven pregled bolnika.

V človeškem telesu jetra delujejo kot mini laboratorij. Ko je penetracija virusov, daje signal o tem - da je proizvodnja kršitve določenih encimov ali zmanjšuje njihovo delovanje, spremembe krvne slike v povezavi z zamenjavo ali pojava novih snovi.

Na primer, lahko posredno kaže na prisotnost HCV v telesu se sprememba v aktivnosti AST in ALT- encima transferazo, dobili v krvi, ki je zaradi bolezni jetrnem tkivu.

Toda ta dejavnik lahko pričuje tudi o drugih boleznih jeter in notranjih organov, zato so specialisti razvili posebne zelo učinkovite metode za diagnosticiranje virusa hepatitisa C.

Da bi preverili, ali obstaja bolezen, je treba opraviti pred laboratorijske, laboratorijske in klinične študije.

Splošna simptomatologija bolezni

Bolezen se lahko nadaljuje v latentni obliki in odide v kronično stopnjo, ta različica pa je v večini primerov določena. Vendar pa po koncu obdobja inkubacije virusa, ki lahko traja največ en mesec, lahko obstajajo nekateri znaki, ki so podobni simptomom gripe. Pomembno je, da jih pozorno spremljate pravočasno in preverite razpoložljivost HCV.

Na takšne znake se uvrščajo:

  • splošno poslabšanje zdravja;
  • povišana telesna temperatura;
  • bolečine v mišicah in sklepih;
  • manj pogosto - pojav kožnih reakcij.

Ti znaki se manifestirajo postopoma, zato lahko bolnik zlahka zmede svoje stanje s prehladom ali enako gripo.

Toda po nekaj dneh se narava poteka bolezni spremeni. Pojavi se:

  • boleče občutke v regiji desnega hipohondrija;
  • slabitev ali popolna izguba apetita;
  • zatemnitev urina;
  • pojasnitev iztrebkov;
  • stanje slabosti, željo po bruhanju.

Če ne začnete zdravljenje v času, bolezen gre kronično.

Znaki takšne spremembe v naravi bolezni so včasih tako nepomembni, da jim okužena oseba ne pripisuje nobenega pomena, pri čemer odpisuje vse za banalno utrujenost. Toda dejansko zahtevajo posebno pozornost in pregled strokovnjakov.

V zadnjem času sem prebral članek, ki opisuje uporabo kompleksa zdravil "SOFOSBUWIR DAKLATASVIR "za zdravljenje hepatitisa C. S tem zapletenim, se lahko FOREVER znebite HEPATITIS C.

Nisem navajen, da zaupam nobenim informacijam, vendar sem se odločil, da ga preverim in naročim. Droge niso poceni, življenje pa je drago! Nisem čutil kakšnih neželenih učinkov iz postopka, že sem mislil, da je bilo vse zaman, a mesec dni kasneje sem opravil teste in PCR ni bil odkrit, ga po enem mesecu zdravljenja ni bilo mogoče najti. Kardinalno izboljšano razpoloženje, spet je obstajala želja, da živimo in uživamo v življenju! Zdravilo sem vzel 3 mesece, zaradi česar virus ni več. Poskusite z vami in če vas zanima, je spodnja povezava članek.

To so simptomi, kot so:

  • hiter začetek utrujenosti;
  • telesna bolezen in nezmožnost obvladovanja običajnih obremenitev;
  • nelagodje v trebuhu;
  • pogost pojav bruhanja in slabost;
  • bolečine mišic in sklepov;
  • poslabšana črevesna funkcija.

Če bolezen pridobi kronični tok, se pojavi zlatenica, zvišana jetra in vranica, krvavitev, izguba telesne mase. To ogroža cirozo jeter ali pojav raka.

Prisotnost zgornjih znakov ali skrbi za penetracijo HCV v krvo nakazuje, da je treba opraviti celovit pregled zdravstvenega stanja in kakovostno zdravstveno oskrbo. Takšna intervencija vključuje laboratorijske teste, ki potrjujejo okužbo in širjenje virusa v telesu.

Laboratorijske raziskave

Diagnoza o hepatitisu C in naknadno določitev režima zdravljenja sta del strokovne usposobljenosti strokovnjaka za nalezljive bolezni, ki je specializirana za prepoznavanje akutnega poteka bolezni. Če ima bolnik kronično obliko bolezni, se mora posvetovati s hepatologom.

Za preučevanje procesa spreminjanja stanja jeter se bolniku priporoča, da opravijo takšne študije kot testi za nivo bilirubina in jetrnih encimov (ALT).

Obstaja tudi obvezno jemanje jetrnih testov za biokemijo, katere študija vam omogoča, da preverite prisotnost bolezni in stopnjo poškodbe jetrnih celic. Ugotovljene krvavitve telesa kažejo na testiranje krvi za prisotnost HCV.

Obstoj virusa in njegovih lastnosti je opredeljen z uporabo posebnih označevalcev. To so označevalci anti-IgM / G in HCV RNA. Takšne analize predstavljajo dve vrsti študij:

Imunološka (ELISA). Ta vrsta temelji na opredelitvi obstoja protiteles proti virusu v krvi. Prisotnost protiteles je zanesljiv kazalnik HCV. Ustvarja jih telo (namreč krvne levkocite), ki uničijo virus. Ko je oseba bolela, protitelesa ostanejo v strukturi krvi za vse življenje. To je zaščitna reakcija imunskega sistema.

Če ta analiza daje pozitiven rezultat, obstaja sum okužbe. Poleg tega mora potencialni nosilec opraviti kompleks potrditvenih diagnostičnih metod. To je posledica dejstva, da obstoj protiteles ni neposreden dokaz prisotnosti bolezni. Morda je telo nekoč že interaktivno z virusom, na primer med cepljenjem. Ali pa na primer lažno pozitiven rezultat pogosto zabeležimo pri nosečnicah.

Za natančno diagnozo mora specialist preveriti rezultate genetskih raziskav. Nedvomna prednost takšnih testov je sposobnost diagnosticiranja zgodnje faze bolezni, enostavnosti uporabe, zmožnosti nadzora nad napredovanjem okužbe. Pomanjkljivosti ELISA vključujejo nezmožnost določanja prisotnosti virusa, vendar le ustrezna protitelesa proti njej;

Genetski (PCR). Ta vrsta temelji na določitvi genetskega materiala HCV v krvi s PCR (polimerazno verižno reakcijsko metodo). Določimo prisotnost RNA virusa. Posledično so na voljo podatki o koncentraciji virusa in njeno članstvo v določeni vrsti. Ta metoda lahko zazna celo majhno koncentracijo HCV.

Ker lahko bolezen biti drugačne narave izvora in posledično različne vrste virusov, ki jo povzročajo, študija s PCR zagotavlja najbolj popolne informacije o funkcijah etiološke je, da virus, ki je sprožil bolezni. Prednosti te vrste analize se štejejo za kvalitativno in kvantitativno študijo HCV v krvnem serumu. To omogoča, da zdravnik predpiše optimalno shemo, da se znebite bolezni, za spremljanje dinamike bolezni, za oceno učinkovitosti izbranih metod zdravljenja.

Ta analiza je sestavljena iz treh faz: kakovostnega PCR, nato kvantitativnega PCR in določanja genotipa. Zahvaljujoč najnovejšim raziskavam lahko strokovnjak najučinkoviteje izvaja terapijo za bolezen in uporablja zdravila, primerna za določeno vrsto virusa. To bo pomagalo čim prej odpraviti bolezen.

Po opravljenem laboratorijskem testu zdravnik predpisuje optimalni režim zdravljenja:

  • če so biokemični kazalniki v mejah norme, se ugotavlja opazovanje bolnikovega stanja in se imenujejo periodični ponovitve študij;
  • v prisotnosti nenormalnosti testov jetrne funkcije in ELISA rezultati pozitivni PCR, strokovnjak določi kliničnih študij atributi shemo in dinamiko učinkovitosti nadzora bolezni in izbranih zdravil in zdravil.

Kakšna je značilnost klinične diagnoze? Za določitev stopnje poškodbe jeter se uporablja ultrazvočna metoda. Na podlagi podatkov, pridobljenih med SPM, lahko specialist presodi spremembe v velikosti organa, njegove strukture, strukture, gostote tkiva in v nekaterih primerih - o funkcijah.

Natančnejši podatki o stanju jeter dajejo analizo na biopsiji, s katero se ugotovi stopnja fibroze in nekroze, ki povzroča vnetne poškodbe.

Na podlagi vseh vrst diagnoze zdravnik določi diagnozo in predpisuje najučinkovitejšo zdravljenje. Če strokovnjak obstaja sum o prisotnosti virusa ali njegova pripadnost določeni vrsti, po možnosti, da potencialni bolnik bo lahko ponovno imenovani oziroma dodatne teste, ki bodo pomagali vzpostaviti jasnejšo sliko o svojem stanju.

Hepatitis C: načini okužbe, diagnoze, načini zdravljenja

Hepatitis C (hepatitis C) je vnetna bolezen jeter, ki jo povzroča okužba telesa z virusom HCV, virusom hepatitisa C. Ko se virus hepatitisa C pomnoži in se poškoduje jetrno tkivo, se razvijejo patološki procesi, se razvije ciroza jeter in razvijajo se raki. Ta oblika velja za najbolj nevarno vrsto hepatitisa ne le zaradi sposobnosti, da prekinejo celotno delovanje telesa in povzroča bolezni, ki vodijo v invalidnost ali smrt, ampak tudi zaradi narave bolezni. Simptomi hepatitisa C praviloma niso izraženi, okužba poteka v latentni obliki in cepiva proti hepatitisu C ni.

Kaj je hepatitis C (hepatitis C)?

Hepatitis C (HCV) je postal znan kot ločena bolezen že dolgo pred odkritjem določenega povzročitelja. "Non-A non-hepatitisa B", ne-A, je bil ne-B hepatitis (NANBH) kot manifestacije bolezni, ki mu je dovoljeno, da se sklicuje na hepatitis skupino, vendar se razlikujejo potek bolezni in hudih zapletov. Kasneje so se virusi, ki so povzročili hepatitis D in G, izolirali tudi pri sortah hepatitisa.
Prvič je bila leta 1989 izolirana posebna oblika virusa. Trenutno je uradno identificiranih šest genotipov virusa HCV in še 5 laboratorijskih testov. Znano je tudi približno 90 podtipov HCV. Najpogostejša oblika je prva oblika virusa, je tudi odgovorna za najhujšo obliko hepatitisa C, ki je odporna na terapijo z interferonom.
Različnost virusa hepatitisa C, proizvodnja novih genotipov med okužbami otežuje oblikovanje cepiva proti tej bolezni, ki je trenutno po mnenju statistikov bolnih okoli 150 milijonov ljudi na svetu. Vsako leto zaradi zapletov, ki jih povzroča hepatitis C, umre okoli 350 tisoč ljudi. Specifična izbrisana simptomatologija vodi v situacije, ko se med analizo po nesreči zazna diagnoza hepatitisa HCV ali se ugotovi na stopnji razvoja zapletov. Aktivne mutacije virusa povzročajo nastanek spremenjenih kopij genotipa, kar povzroča visok odstotek kronične oblike bolezni.

Znaki hepatitisa C

Foto: Jarun Ontakrai / Shutterstock.com

Pojav prvih znakov hepatitisa C je odvisen od odpornosti telesa. Od infekcije do primarne simptomatike lahko traja od 2 tednov do 6 mesecev. Če obstaja sum okužbe z okužbo za zgodnjo diagnozo, se za ugotavljanje prisotnosti RNK virusa v krvi, 2 tedna po okužbi opravi PCR krvni test.
Hepatitis C ima značilnost "ljubeznivega morilca": latentni simptomi in hudi zapleti povzročijo resno poškodbo telesa v odsotnosti sumov na prisotnost HCV.
Prvi simptomi te oblike virusnega hepatitisa vključujejo zmanjšanje delovne kapacitete, astenično stanje, občutek utrujenosti.
Glavni znaki hepatitisa C, ki se kažejo v stadiju izrazito množenja virusa v telesu, se šteje za:

  • zmanjšanje ali pomanjkanje apetita;
  • slabost;
  • splošna šibkost, astenija, poslabšanje zdravja;
  • bolečine v sklepih;
  • ikterus kože, sluznice, sklerje očesa kot posledica zvišanja koncentracije bilirubina v krvi zaradi poškodb jeter pri hepatitisu C;
  • povečanje velikosti jeter in vranice.

Vzroki hepatitisa C, načini zajezitve hepatitisa C

Metoda prenosa virusa HCV je hematogena, s krvjo in drugimi biološkimi tekočinami. Infekcijski agent je prisoten tudi v najmanjših kapljicah krvi in ​​ostane aktiven do 5 dni, ko se tekočina suši pri sobni temperaturi. Infekcija se pojavi z zaužitjem okužene HCV biološkega materiala v drug organizem z invazivnimi postopki, kot tudi v stiku s površino rane (praske, praske, razpoke in poškodbe sluznice in tako naprej. D.). V zvezi s tem opredeli glavne načine okužbe:

  • preko injekcij z nesteriliziranimi brizgami za enkratno uporabo, igle;
  • transfuzijo krvi, plazmo iz okuženega darovalca, organe za presaditev in tkiva;
  • v procesu uporabe nestrokovnih instrumentov v zobozdravstvenih ordinacijah, kozmetičnih salonih, manikirnih salonih, s piercingom, risanju tetovaž, itd.;
  • s travmatičnim spolnim stikom: dovolj majhne razpoke na sluznici;
  • navpični način okužbe: od matere do ploda med nosečnostjo;
  • gospodinjski način okužbe pri uporabi rezil, zobnih ščetk itd. (to je zelo redko);
  • pri dostavi in ​​operativnih postopkih, travme v nesteroidnih pogojih.

Inaktivacija virusa se pojavi, če se površine obdelajo z razkužili, ki vsebujejo klor, če jih obdelamo z vodo s temperaturo najmanj 60 ° C 40 minut ali s tremi minutami.
Na skupin prebivalstva tveganja, ki so izpostavljeni visokim tveganjem za okužbo s HCV, opravlja zdravstveno osebje in zaposleni v sanitarnih-in-epidemiološki institucij, odvisnikov od drog z invazivno dajanju zdravil, ljudje z velikim številom nezaščitenimi spolnimi odnosi, spolni partnerji okuženih bolnikov, vključno s skritimi nosilci hepatitisa C, ljudje z avtoimunskimi boleznimi, imunske pomanjkljivosti itd.
Virus hepatitisa C se ne prenaša s pritiskom rokuje kapljice v zraku, redkih primerov okužbe pri dojenih (v prisotnosti ran na dud razpok pri materi in poškodbe sluznice v ustih otroka) in stik gospodinjstvo, delitev. Preprečevanje hepatitisa C so sterilizacije medicinskih in kozmetičnih orodij za invazivne posege in injekcije, skladno s pravili osebne higiene v domu, in mehanskih postopkov za zaščito seks z neznanimi partnerji.
Preprečevanje okužbe otroka s hepatitisom C med nosečnostjo je posebno zdravilo za zmanjšanje virusnega bremena med nosečnostjo, pa tudi za pregled in zdravljenje ženske pred spočetjem.

Vrste in stopnje hepatitisa C

Obstajata dve obliki hepatitisa C. Akutno obliko te virusne okužbe se v redkih primerih diagnosticira zaradi izbrisane klinične slike. Najpogosteje se odkrivanje akutne faze pojavi po nesreči med preventivnim pregledom ali ko oseba išče diagnozo v primeru sumljivega stika.
S pravočasnim zdravljenjem se 20% akutnih oblik hepatitisa C popolnoma pozdravi. V odsotnosti ali neučinkovitosti zdravljenja akutni hepatitis C postane kroničen.
Hepatitis C v kronični obliki se lahko pojavi tudi asimptomatsko brez učinka virusnega bremena na telo brez kliničnih manifestacij in specifičnih simptomov. Ta skupina skritih nosilcev virusov otežuje zbiranje statističnih podatkov o razširjenosti HCV, ker se le to določi s krvnimi preiskavami za označevalce hepatitisa, vendar lahko prispeva k širjenju okužbe.
Klasični potek kroničnega hepatitisa C spremlja poškodba jetrnih celic, razvoj tkivne fibroze. V odsotnosti zdravljenja fibrotični žari povzročajo razvoj ciroze jeter, nastanek tumorjev raka in drugih nevarnih zapletov.

Zapleti hepatitisa C

Foto: Den Rise / Shutterstock.com

Stopnja razvoja zapletov je odvisna od splošnega stanja telesa, sposobnosti imunskega sistema, da proizvede protitelesa, oblike genotipa in prisotnosti mutacij virusa ter življenjskega sloga in prehrane človeka. Uporaba alkohola, maščob živil vodi do znatnega pospeševanja razvoja patoloških procesov, alkoholnega, toksičnega hepatitisa.
Hepatitis C lahko povzroči naslednje bolezni in motnje:

  • fibroza jetrnega tkiva;
  • steatohepatitis, zamenjava jetrnega tkiva z maščobo;
  • ciroza jeter;
  • hepatocelularni karcinom, rakasta transformacija jetrnega tkiva;
  • hipertenzija portala;
  • ascite, kopičenje tekočine v organih peritoneja;
  • krčne žile notranjih organov;
  • jetrna encefalopatija;
  • kronično zastrupitev telesa z izdelki tkivnega dezintegracije in zaradi nezadostne funkcije jeter;
  • latentna notranja krvavitev.

Hepatitis C je prav tako nevaren, ker povzroča povečano tveganje za nastanek hepatitisa B, če je izpostavljen okužbam zaradi zmanjšane delovanja jeter.

Diagnoza hepatitisa C

Za diagnozo hepatitisa C se uporabljajo naslednje metode:

  • zbiranje anamneze in pregled bolnika, palpacija peritonealnih organov;
  • biokemijski test krvi;
  • krvni test za protitelesa proti virusu hepatitisa C (anti-HCV) in HCV-RNA s PCR;
  • krvni test za prisotnost protiteles IgM razreda (anti-HCV IgM), ki kažejo akutno stopnjo bolezni;
  • splošna analiza krvi, preiskava koagulacijskih značilnosti (koagulogram);
  • ultrazvočni pregled jeter, vranice, peritonealnih organov.

V nekaterih primerih je predpisan laboratorijski pregled jetrnih tkiv (biopsije).
Te metode omogočajo ugotavljanje prisotnosti okužbe in določitev natančne diagnoze z opredelitvijo genotipa HCV.

Zdravljenje virusnega hepatitisa C na različnih stopnjah

Hepatitis C pomeni celovito zdravljenje, katerega cilj je podpiranje telesa in boj proti virusu HCV za skupen ali specifičen protivirusni učinek. Potek zdravljenja bolnikov s hepatitisom C vključuje:

  • terapija z zdravili z protivirusnimi zdravili;
  • jemanja zdravil za vzdrževanje delovanja jeter;
  • pripravki za restavrativno delovanje, imunomodulatorji, stimulansi imunosti.

Potek zdravljenja z zdravili ne bo učinkovit, če se ne upoštevajo pravila prehrane, omejuje telesna aktivnost, opazuje režim dneva. Virus hepatitisa C je agresiven učinek na humani imunski sistem in jeter, kar vodi do potrebe po prehrani varčevalni, pravilno počitek, da se prepreči možnost stikov z drugimi virusnih in bakterijskih infekcij.

Tradicionalno protivirusno zdravljenje za hepatitis C

Za boj proti virusom HCV protivirusnih zdravil, ki se uporabljajo za spodbujanje imunsko telesa. Najbolj učinkovit (45-50% zdravilo glede na fazo bolezni in HCV genotipa povzroča hepatitis) veljajo zdravil ribavirina in interferon alfa-uporablja, glede na fazo in splošno stanje pacienta, ločeno ali v kombinaciji.
Splošni potek zdravljenja s temi zdravili, odmerkom in režimom določi zdravnik-hepatolog na podlagi diagnostičnih podatkov in bolnikovega odziva na zdravila. Povprečno trajanje antivirusnega zdravljenja s temi zdravili je 12 mesecev.
Kombinacija zdravil lahko povzroči alergijske reakcije, njihova uporaba je nesprejemljiva v nosečnosti in pri nekaterih boleznih. Učinkovitost zdravljenja se ocenjuje na podlagi podatkov o krvnem testu za zmanjšanje ravni virusnega bremena (HCV RNA) in stopnje aktivnosti transmnase.
Zdravila lahko povzročijo pomembne neželene učinke. Prejemanje skupino interferona v velikih odmerkih pogosto pa ga znatnega poslabšanja značilno obdobje prilagajanja zdravila skupaj (do 1 meseca) in spremljati hipertermija do 38-39 ° C, glavobol in bolečine, hujšanje, suha koža, izpadanje las. Takšni simptomi prehajajo neodvisno in ne zahtevajo odtegnitve zdravila.
3-4 mesece po začetku jemanja zdravil interferonske skupine lahko opazimo spremembo krvne slike: zmanjšanje koncentracije trombocitov, levkocitov. Odvisno od stopnje spremembe je lahko zdravljenje na kratko prekinjeno.
Resni zapleti, ki zahtevajo popravek zdravljenja, so krvavitev v krvi in ​​pritrjevanje bakterijskih okužb.
Pri jemanju ribavirina lahko pride do manjše dispepsije, hemolitične anemije, povečane koncentracije sečne kisline, glavobola.
Zdravljenje poteka pod nadzorom strokovnjakov.

Neposredno delujoča zdravila na HCV

Leta 2013 je bilo novo zdravilo, razvito več kot 11 let, klinično preskušeno in odobreno kot protivirusno sredstvo za neposredno delovanje. Sofosbuvir, ki ga proizvaja Gilead (ZDA), je patentirana kot edina aktivna sestavina, ki je trenutno na voljo, v skladu s študijami, ki ozdravi 95% primerov hepatitisa C.
Zaradi visokih stroškov proizvodnje (osnovni potek zdravljenja s sophosbuvirjem v Združenih državah stane 84.000 dolarjev) je družba prenesla licenčne pravice za izdelavo zdravila. Trenutno je proizvodnja Hepcinat v Indiji prav tako na trgu zdravil s stroški zdravil za terapijo na 880-1200 ameriških dolarjev.
Antivirusno zdravilo vsebuje kombinacijo sophosbuvira in daklatasvira, ki jemlje peroralno. Odmerjanje in trajanje tečaja izračunava hepatolog na podlagi podatkov o genotipu virusa, stadiju fibroze jeter, posameznih značilnosti bolnika. Droge so učinkovite za vse genotipe HCV, nimajo kontraindikacij pri bolnikih, okuženih s HIV. Zdravljenje poteka od 12 do 24 tednov.

Hepatoprotectors in hepatitis C

Priprave - hepatoprotektri, ki so del zdravljenja za hepatitis C, so namenjeni vzdrževanju funkcij prizadetega organa. Brez zdravljenja telesa bolezni pomagajo vzdrževati in obnoviti zdravje jeter, regenerirati tkiva.
Za takšne pripravke, ki so učinkoviti pri hepatitisu, nosite Essentiale, Karsil, Lipoevuju kislino, Silimar, Fosfogliv in druge. Potek jemanja hepatoprotektov se začne ne glede na prisotnost ali odsotnost protivirusne terapije in konča s kliničnim zdravljenjem jeter, kar potrjujejo laboratorijski testi in instrumentalne študije.

Imunomodulatorji

Ker je imunski sistem se sooča s konstanto virusne obremenitve, pri čemer se zdravilo namenjeno krepitvi vstopu na celotno terapijo dajati bolnikom s hepatitisom C. Najpogostejši imunomodulatorji za hepatitis C vključujejo droge in Zadaxin Temogen.

Dietna hrana

Zdravljenje hepatitisa C in njegovih zapletov spremlja imenovanje zdravstvenega sistema za prehrano Pevznerja, diete številka 5. Skladnost z dieto pomaga olajšati delovanje jeter in drugih organov prebavnega sistema, upočasnjuje razvoj zapletov hepatitisa C.
Temeljna načela porabe prehrana №5 mejno izdelkov, ki povečujejo izločanje prebavnih sokov: mastne, začinjene, slani, dimljeni, konzervirane hrane, kave, močan čaj. Alkoholne pijače so popolnoma izključene. Priporočena dnevna prostornina tekočine (voda, kompoti, sadne pijače in zelenjavni sokovi z nizkim razdražljivim učinkom na želodec) je od 2 do 3 litra.

Napoved rezultatov zdravljenja hepatitisa C

Napoved zdravljenja za virusni hepatitis C je odvisna od časa začetka terapije, stopnje bolezni, prisotnosti in obsega zapletov, izbire zdravljenja in imenovanja specialista.
Najugodnejša prognoza za zgodnje zdravljenje v zgodnji, akutni fazi hepatitisa C, kjer je bolezen še ni potekel v kronično okužbo s hudimi zapleti degeneracijo jetrnih celic, toksičnih poškodb telesa.
Spoštovanje načel prehranske prehrane, zavračanje alkohola v veliki meri pomagajo preprečiti zgodnji razvoj zapletov in na splošno ohraniti zdravje.
Glede na izbiro zdravil za neposredno ali splošno protivirusno delovanje je napoved za virusni hepatitis C od 45 do 95% stopnje izločanja. Kompleksno zdravljenje hepatitisa C z uporabo novih protivirusnih zdravil pomaga zdraviti bolezen in preprečiti zaplete.

Preprečevanje hepatitisa C

Foto: Alexander Raths / Shutterstock.com

Zaradi velikega števila genotipov virusa te vrste hepatitisa in njegove zmožnosti mutacij, ustvarjanje številnih podvrst, še vedno potekajo specifična preprečitev hepatitisa C v obliki cepljenja. Nespecifični ukrepi za preprečevanje bolezni s virusnim hepatitisom C se štejejo za omejevalne ukrepe za zaščito pred penetracijo virusa v telo in splošno krepitev telesa.
Hepatitis C se prenaša samo s stikom z biološko tekočino, ki vsebuje virus, z rano ali podkožnimi tkivi. Zato je preprečevanje bolezni izključitev položajev takšnih stikov:

  • nadzor nad spoštovanjem sanitarnih in higienskih norm pri uporabi storitev zdravstvenih ustanov, kozmetičnih in zobozdravstvenih salonov, brez možnosti uporabe netezilnih kirurških instrumentov, brizgalk za enkratno uporabo;
  • omejevanje števila spolnih stikov z neznanimi partnerji, uporaba osebne zaščitne opreme med spolnim odnosom;
  • Redna analiza markerjev virusa pri delu v pogojih povečanega tveganja okužbe.

Približno 20% primerov okužbe z virusom hepatitisa B tega obrazca so neznane etiologije, bolezen se kaže pri ljudeh, zdravega načina življenja, ni podvržen postopku transfuzijo krvi ali presaditvijo organov, imajo redne spolne partnerja, in niso nagnjeni k vbrizgavanjem drog. Preprečevanje - ukrep preprečevanja bolezni, ki ga je treba upoštevati tudi v odsotnosti očitne verjetnosti okužbe.
Drugi ukrepi nespecifičnega preprečevanja vključujejo zdrav način življenja, omejujejo uporabo alkohola, uravnoteženo prehrano, ki lahko zadrži razvoj bolezni in njegove zaplete, tudi če virus vstopi v telo.

Hepatitis C: preventivni ukrepi v prisotnosti bolnika v družini

Hepatitis C je nalezljiva bolezen, ki se prenaša predvsem s krvjo. Ko živite skupaj na okuženem pacientu na istem območju, ni potrebe po zaščiti prostorov, preprečevanju otipnih stikov ali uporabe ločenega jedilnega pribora.
Pomembno je, da se izključi skupno uporabo ene britje stroj (zaradi možnih kosov) zobne krtačke razkuževanje površin, na katerih čaka na kapljico krvi doma poškodb belilno raztopino (1: 100), tekočine, z vreliščem ali izpiranje pri 60 ° C, ki vsebujejo klor, opazovanje ukrepi zaščite med spolnim odnosom, ne omogočajo poškodb genitalij, razvoj bolezni, ki jih spremljajo poškodbe kože ali sluznice. Pri prisotnosti poškodb, odprtih ran, je priporočljiva previdnost.
Zaradi zmanjšane odpornosti telesa na druge vrste hepatitisa se družinskim članom in skrbnemu osebju priporoča cepljenje proti hepatitisu A in B.

Preprečevanje okužbe ploda in novorojenčka

Zaradi izbrisanih simptomi prisotnosti žensk hepatitisom C se lahko diagnosticirali v fazi nosečnosti pri ocenjevanju testov za okužbo. V takih primerih je prenos virusa na plod prognoza je odvisna od virusnega bremena matere, ki je določena s številom naslovov v krvi.
Da bi zmanjšali verjetnost okužbe ploda, je priporočljivo, da vzamete nekaj generičnih zdravil in imenujete hepatoprotektore, da zmanjšate verjetnost zapletov nosečnosti zaradi povečanega stresa na jetrih.
Na majhno virusno obremenitev verjetnosti rojstva okuženega otroka je majhna, ampak za ugotavljanje prisotnosti virusa v krvi lahko le 1-1,5 let po rojstvu, kot otrokov krvi za dolgo časa, so protitelesa materina.
Popolna profilaksa je krvni test za prisotnost virusa pred zasužnjami in potek zdravljenja bolezni, če je prisoten pred nosečnostjo. Med gestacijskim obdobjem so protivirusna zdravila prepovedana zaradi uporabe zaradi možnih teratogenih učinkov na plod in povečane nevarnosti splava.
Da bi zmanjšali verjetnost okužbe novorojenčka, se priporočajo enaki ukrepi, kot če živite pri okuženi odrasli osebi.
Dojenje mati s hepatitisom C je zdaj varno, saj v materino mleku ni virusa. Vendar pa boste morali skrbno spremljati stanje kože in bradavico dojke zajema, da se prepreči morebitne nariban, razpoke, in preverite ustne sluznice v prisotnosti otroške rane, odrgnine, glivična okužba.
Če naletite na bradavico območje microtrauma priporočamo uporabo podloge, ki ne dopuščajo nobene tekočine iz rane v ustih otroka, ali pa začasno prekine dojenje do okrevanja kože.

Laboratorijska diagnostika hepatitisa C

MI Mikhailov, Inštitut za epidemiologijo in mikrobiologijo. NF Gamalei RAMS, Moskva

Pri navedbi diagnoze "hepatitisa C" je treba upoštevati naslednje najpomembnejše dejavnike:

  • kazalniki aktivnosti "jetrnih" encimov;
  • prisotnost ali odsotnost označevalcev okužbe z virusom hepatitisa C (HCV) in drugimi hepatotropnimi virusi;
  • epidemiološka zgodovina;
  • rezultate kliničnega pregleda bolnika. Le celovit račun teh dejavnikov omogoča diagnosticiranje te bolezni z visoko stopnjo zanesljivosti. Laboratorij Delavec mora zagotoviti objektivne informacije o določitvi obsega virusnih antigenov in protiteles, kot tudi HCV RNA, ki omogoča klinika, zaposleni storitev za transfuzijsko medicino in epidemiologi, da se odločijo izzive, s katerimi se srečujejo. Najpogosteje je:
  • Identifikacija oseb s HCV za zmanjšanje hepatitisa C po transfuziji;
  • diagnoza in diferenciacija akutnega in kroničnega hepatitisa C;
  • napoved bolezni;
  • imenovanje, ocenjevanje in napoved učinkovitosti terapije;
  • preučiti širino HCV pri populaciji in različnih skupinah prebivalstva.
    Hkrati pa so glavna področja dela laboratorija:
  • razvoj in izbor najbolj informativnih metod za odkrivanje markerjev okužbe s HCV;
  • opredelitev meril za objektivno oceno doseženih rezultatov;
  • razvoj optimalnih algoritmov za izvajanje laboratorijskih študij;
  • uvedba sistema za izboljšanje zaznavanja markerjev okužbe s HCV.

    Osnova laboratorijsko diagnostiko hepatitisa C. HCV služijo znanje o svojem replikacije, informacije o dinamiki videz in izginotje označevalcev okužbe, pa tudi sodobno imunokemijska in molekularno biološke metode za odkrivanje antigenov, protiteles in nukleinskih kislin.

    VIRUS HEPATITIS C. HCV je bil prvič ugotovljen leta 1988, ko je skupina raziskovalcev, ki sta jo vodila M. Houghton in Choo Q. L., z uporabo novih molekularnih bioloških metod preiskave klonirala in sekvencirala virusni genom [1]. Delec virusa hepatitisa C ima kroglo obliko s povprecnim premerom okoli 50 nm [2,3]. Poskusi vizualizacije in preučevanja strukture virusa hepatitisa C so bili narejeni od odkritja virusa, vendar še vedno ni dobro dokumentiranih rezultatov teh študij, kar je lahko posledica težav pri kopičenju virusnih delcev v zahtevanih količinah.

    član VGSedinstvenny iz rodu hepacivirus v družini Flaviviridae, ki vključuje viruse, kot so virusi bikov drisko in prašičjo kugo (rod pestivirusov) in virus rumene mrzlice, virus Dang in GB-virus: GBV-A, GBV-B in GBV-C / HGV (rodu Flavivi-rus). Strukturo virusa hepatitisa C je mogoče predstaviti na naslednji način (shema št. 1). Nukleokapside obsega RNA virus hepatitisa C nukleokapsidami vrhu premazan s lipidno ovojnico vgradno v njih ovojne proteine, ki so kodirani s HCV RNA. Virus genom vsebuje linearni enoverižne RNA molekulo pozitivno polariteto, dolžino okoli 9600 nukleotidov. Organizacija gena HCV je podobna drugim flavivirusom. Odlikuje dve coni, ki kodirajo strukturne in nestrukturne (funkcionalne) proteine. Gene, ki kodirajo strukturne proteine, so v območju 5 'genomov virusa in nestrukturne v območju 3'. Gen HCV ima en odprt bralni okvir (ORF), enojni polipeptidni (približno 3000 aminokisline), ki pod vplivom celičnih in virusnih proteaz razrezane na strukturne in nestrukturiran proteinov.

    Sl. 1. Strukturni elementi HCV

    Strukturni proteini vključujejo proteine, ki jih kodirajo Core, El in E2 z območji HCV RNA. To je pokazala tri oblike C-HCV proteinov: celovečerne (p21) z molekulsko maso - 21 kD, prirezan (P19) in obliko (P16) so odkrili v nukleoli okuženih hepatocitov. Na svoji površini C-proteina nosi različne visoko ohranjen B-celični epitop, katere obstoj je zelo pomembno za detekcijo protiteles proti HCV v laboratorijski diagnostiki hepatitisa C.

    RNA regije HCV-E1 in E2 kodirajo proteine ​​z molekulsko maso 31 in 70 kD. Ti proteini imajo več N-glikozilacijskih mest; V proteinu E1 smo identificirali do 6 takih mest in v E2 - 11. Informacije o majhnih beljakovinah, p7, smo našli v odseku E2, ki ga v virusni strukturi ni bilo.

    Označevanje regij, ki so bližje 3'-koncu HCV RNA - kot območja, ki prenašajo informacije o nestrukturnih beljakovinah virusa - kaže, da ti proteini niso strukturne sestavine viralnega delca. V nestrukturni coni je HCV RNA dodeljena mesta, označena kot: NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A in NS5B. Večina proteinov, ki jih kodirajo nestrukturne cone HCV RNA, so potrebne za replikacijo virusa.

    Primerjalna analiza nukleotidnih zaporedij izolatov HCV RNA, izdelane v različnih regijah po svetu, pa tudi v poteku bolezni iz istega pacienta pokazala osnovno funkcijo virusa - visoka heterogenost RNA. Položaj velike genske variabilnosti HCV RNA je bila osnova teorije razložiti: dolgoročne (včasih vseživljenjsko) nosilec virusa, pogosto razvoj kronične bolezni, težav pri vzpostavitvi učinkovitega zdravljenja in cepiv. Najbolj pomembne razlike HCV RNA sekvenc se koncentrirajo v N-terminalnem delu regije E2, ki se imenuje - "hipervariabilne regije" (HVR) [4].

    Trenutno je 6 glavnih genotipov in več kot 100 podtipov HCV. Genotipi 1a, 1b, 2a, 2b, 2c in več računa za več kot 90% HCV-izolatov pridobljeni v Severni in Južni Ameriki, Evropi, Rusiji, na Kitajskem, Japonskem in v Avstraliji / Novo Zelandijo [5]. Genotipov 4, 5a in 6, so vpisani v osrednji in južni Afriki, jugovzhodni Aziji. V Rusiji in državah SND je bila zabeležena prevalenca genotipa 16 (najmanj 68,9%) [6,7]. Menijo, da se bolniki, okuženi z genotipom 1 (zlasti 1c), odzivajo na zdravljenje v primerjavi z bolniki, okuženi z drugimi genotipi virusa.

    HCV pacientov kroži kot populacije virusnih delcev, katerih genomi med seboj razlikujejo za 1-2% (kvazispetsifichnosti) zaradi mutacij, ki se nabirajo med infekcije in / ali sestavljene v pacienta med okužbo. Ta mutant oblike lahko zagotovi močnejši ali podvajanja lahko pomaga virus, da se izognejo imunski odziv in potencialno vplivajo na izid akutne okužbe, razlike v poteku bolezni in odziv na IFN [8].

    DOLOČANJE ANTI-HCV. Po odkritju virusa HCV in določi svojo vlogo v razvoju po transfuzijo hepatitis - "niti A niti B" raziskovalci so bili izzvani, da razvijejo metode sposobna odkriti tiste s HCV in so primerni za diagnozo akutni in kronični hepatitis C, je bilo ugotovljeno, da so antigeni HCV krožijo v izredno nizkih koncentracijah, in jasno je, da je bila metodološko raven poznih 80-ih letih XX stoletja, ki se uporablja za odkrivanje virusnih antigenov očitno ne zadostuje.

    Leta 1989 je skupina raziskovalcev družbe "Chiron Corporation« pod smeri Q-L.Choo izvede kloniranje HCV RNA in je bil imunološko oligopeptide, ki reagirajo s protitelesi, ki kroži v krvi pacientov s kroničnim hepatitisom "niti A niti B". Ti oligopeptidi so postali osnova za diagnostične droge za odkrivanje protiteles proti HCV. To je ugotovilo hiter napredek pri razvoju in proizvodnji diagnostičnih izdelkov. Glavna metoda za odkrivanje anti-HCV je encimski imunski preizkus kot metoda, ki izpolnjuje zahteve praktičnega zdravstvenega -te Visoka občutljivost, specifičnost in enostavnost vedenja.

    Glede na to, da HCV ostaja v krvi pacientov z akutno in kronično hepatitisa C v kombinaciji z anti-HCV diagnostike osredotočajo razvijalci osredotočena na ustvarjanje testnih sistemov za odkrivanje protiteles, zagotavlja največjo možno identifikacijo nosilci virusa, in čimprej diagnozo akutne okužbe. Raznolikost antigeni in antigenskih determinant, ki jih kodirajo strukturne in nestrukturiran območju HCV RNA, smer določena pri oblikovanju diagnostičnih priprav tega režima in oligopeptidov, ki se uporabljajo za njihovo ustvarjanje. Od časa odkritja HCV so bili ustvarjeni diagnostični sistemi treh generacij (tabela 1).

    Tabela 1
    Diagnostična zdravila za odkrivanje anti-HCV [9]

    Uporabljeni peptidi,
    območja HCV RNA, v kateri
    kodirani so

    % odkrivanje prevoznikov
    HCV

    Čas prvega
    identificirati
    anti-HCV iz
    zgodnja zlatenica

    5-1-1 NS3
    C100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 in NS4
    NS3p NS3
    C 100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 in NS4
    NS3p NS3
    Peptid NS5

    Uvedba dodatnih peptidov, zlasti s22-3 (Core), v diagnostičnih pripravkov iz 2. in 3. generacije dovoljeni rešiti glavni problem, to pomeni, da se poveča občutljivost, specifičnost, in kar je najpomembneje, odkrivanje anti-HCV. Zahvaljujoč diagnostičnim krivuljam tretje generacije je mogoče odkriti do 97% nosilcev HCV. Hkrati je bila določena razprava posledica uvedbe peptida, kodiranega z regijo NS5 HCV RNA, v diagnosticum. Po mnenju nekaterih raziskovalcev prisotnost tega peptida ni bistvenega pomena za izboljšanje kakovosti diagnostičnega zdravila. [10,11]. Vendar pa se protitelesa proti NS5 lahko odkrijejo v zgodnejšem času okužbe, kar izboljša kakovost laboratorijske diagnostike akutnega hepatitisa C. [12].

    Trenutno se uporabljajo diagnostični pripravki tretje generacije po vsem svetu, tudi v Rusiji. Peptidi, ki se uporabljajo v diagnostičnih pripravkov, dobljenih z rekombinantno tehnologijo (npr diagnostičnih podjetja: "Diagnostična sredstva", Novgorod; "vektor", Novosibirsk; "Roche"; "Abbott" et al.), Ali sintetični ( 000 MC "Avicenna", Sankt Peterburg, "Organon" itd.). Diagnostika, v kateri sta bila hkrati uporabljena obe vrsti peptidov, je dobila oznake kot pripravke 4. generacije. Po njihovih značilnostih ta zdravila nimajo bistvenih razlik. Primerjalni testi, ki jih redno izvaja Ministrstvo za zdravje Rusije, so pokazali primerljivo občutljivost diagnostičnih pripravkov domačih in tujih proizvajalcev.

    Ugotovljeno je bilo, da je uporaba diagnostičnega tretje generacije za odkrivanje anti-HCV med imunokompetentni populaciji (npr dajalcev krvi) ocenjena na 98,8-100%. Istočasno med imunsko ogroženih posameznikov, kot so bolniki po ledvični transplantaciji, kostnega mozga ali oseb, okuženih s HIV, je ta številka precej nižja - 50 - 95% [12]. S.George et al. [13] je pokazala, da ima 8,4% bolnikov z okužbo s HIV lažno negativne rezultate odkrivanja anti-HCV. In pri takih bolnikih med opazovanjem se lahko zabeleži učinek seropreverzije; registracija pozitivnega rezultata po seronegativnem obdobju anti-HCV [14].

    Eden od najpomembnejših problemov pri izvajanju študij za prisotnost anti-HCV je lažno pozitivno. Njihov videz je lahko posledica nespecifične interakcije reakcijskih komponent, možnih navzkrižnih reakcij z drugimi virusnimi antigeni in številnimi drugimi dejavniki. Raven lažno pozitivnih rezultatov pri odkrivanju anti-HCV z različnimi diagnostičnimi zdravili lahko doseže 10-20% [15,16]. Povečano število takih rezultatov je bilo opaženo pri bolnikih z onkološkimi in avtoimunskimi boleznimi, osebami z imunsko pomanjkljivostjo in bolniki s sifilisom [16,17]. Zaradi obstoja lažnih pozitivnih rezultatov naloga laboratorijskega delavca razlikuje od dejanskega odkrivanja anti-HCV. Da bi rešili ta problem, se serum odkrije v krvnem serumu HCV RNA. Vendar pa negativni rezultat odkrivanja HCV RNA ne omenja prisotnosti lažno pozitivnega odkrivanja anti-HCV. Treba je opozoriti, da so anti-HCV izoliramo in krožijo v krvi bolnika, ki je predelan iz akutnega hepatitisa C (10-15%) ali S odprava HCV RNA pojavili kot posledica zdravljenja.

    POTRDITEV (DODATNI) PRESKUSI. Za razlikovanje lažno pozitivnih vzorcev in vzorcev, ki res vsebujejo protitelesa proti HCV, so bili razviti dodatni (dopolnilni) testi. Najbolj pogosto uporabljena v teh testih imunoblot princip [npr - preskus riba ( "Ortho-Klinična diagnostika"); "LiaTek HCV" (Organon Teknika)], ko adsorbira na nitrocelulozno membrano v obliki posameznih trakov antigenov kodirana z različnimi območja HCV RNA. Anti-HCV interakcijo z antigeni adsorbiranih uporabljajo protitelo-encim označeni proti človeški Ig G z njihovo kasnejšo detekcijo uporablja substrat kompleks. Poleg imunoblot kakor tudi dodatne teste uporabljajo diagnostična sredstva za odkrivanje anti-HCV pred specifičnih antigenov, ki jih kodirajo različne območja HCV RNA [ "Spectrum 4" ( "ImBio" Nižni Novgorod; RecombiBest proti HCV-spektra "- zao" Vector Najboljše ", Novosibirsk, IFA- Anti-NSO-SPEKTR, NPO" Diagnostični sistemi ", Nižni Novgorod].

    Zasnova in izvedba teh testov je vzporedna z uvedbo presejalnih testov za anti-HCV, ponavljanje načelo širi spekter peptidov, ki se uporabljajo v vsaki od kolena diagnostičnih agentov. Tako se diagnostični RIBA-III razlikuje od prejšnje generacije z dodatkom peptida, kodiranega z območjem NS5. Načela potrditi pozitiven rezultat odkrivanja anti-HCV predvsem vključujejo: možnost (v nekaterih primerih) natančnejše rezultate encimsko reakcijo, z reakcijo s posameznimi peptidi, kot tudi uporabo v a z razpršenim spektrom DIAGNOSTICUM peptidov, ki se ne uporabljajo pri presejalne teste. Samo uvedba novih peptidov omogoča povečanje diagnostične vrednosti potrditvenih testov.

    Razlaga dobljenih rezultatov, na primer v testu, kot je RIBA-III, vključuje tri možne odgovore: pozitiven, negativen in nedoločen rezultat. Slednja je podana, če ni jasnih navedb (v skladu z navodili, ki so priložena diagnostičnega kompleta), ki omogoča eno, da povem nekaj o prisotnosti ali odsotnosti anti-HCV v testnem vzorcu. Korelacija spektra posnetih odzivov med potrditvenimi testi se razlikuje glede na značilnosti skupin bolnikov, pri katerih je odkrit predvsem anti-HCV [18]. Po J.M. Pawlotsky et al. [19], v polovici primerov rezultatov, razlagati kot "nejasen", lahko odkrijejo HCV RNA. Po našem mnenju je legitimnost odgovor - "nedefiniran odkrivanje posledica anti-HCV", ki ga je zdravnika laboratorijskega osebja izda, očitno ne le v potrditveni test, in redni pregledi za prisotnost anti-HCV. Nujnost takšne razlage dobljenih rezultatov je odraz trenutnega stanja laboratorijske diagnoze hepatitisa C.

    DOLOČANJE IGM ANTI-HCV. Trenutno so izdelani in izdelani diagnostični sklopi za odkrivanje anti-HCV IgM podjetja: "Vector Best"; "Diagnostični sistemi"; "ImBio", "Abbott" in drugi. V fazi snovanja diagnostičnih kompletih so bili razviti za ELISA kompletov, na podlagi katerih so peptidi, ki jo kodira različnih regij HCV RNA [20]. Izbira je bila ustavljena na peptidu, kodiranem s Core regijo HCV RNA in odkrivanjem IgM protiteles proti njej. Kot pri preskusih za odkrivanje anti-HCV (IgG) lahko v študiji IgM anti-HCV zabeležimo lažno pozitivne rezultate. Po Stevensoni D.L. z et al. hkrati imele povišano stopnjo revmatoidni faktor, ki prispeva k izgledu lažno pozitivnih rezultatov [21], da 70% bolnikov s kroničnim hepatitisom C s prisotnostjo protiteles proti HCV IgM. Obenem pa po Pawlotsky J.M. prisotnost revmatoidnega faktorja ne vpliva na kakovost detekcije IgM anti-HCV [22].

    DOLOČANJE ANTIGENOV HCV. Možnost določanja HCV antigenov je pritegnila raziskovalce takoj po odkritju virusa. Teoretična možnost njihovega testiranje je bilo dokazano, [23] Krawczyński K. s sod ugotovljeno, da imunohistokemično jetrne tkivu HCV antigenom, kar kaže na specifičnost imunofluorescence sijaj. Uporaba polinenasičenih in monoklonskih protiteles proti različnim antigenom HCV vstopi ugotovili prisotnost HCV jedrnega Ag, antigeni kodiranih NS3 in NS4 območja HCV RNA v jedru in citoplazmi hepatocitov, pri 60-90% bolnikov s kronično HS [24].Vendar, nadaljnje študije so pokazale, da antigene HCV je mogoče odkriti v manj kot 5% jetrnih celic.

    Prvi Diagnostični preskusni sistemi ( "Orto protiteles za Core antigen (glodalcih monoklonskih) EL1SA testiranje sistema" in "Imucheck F-HCV Ag Core Kokusai") za odkrivanje HCV antigena se na trgu pojavili imunoloških zdravil v letu 1999. Ker je bil cilj izvoljen Core detekcijo HCV antigenov, ki opredeljujejo trdni fazi ELISA izvedbenem konstruirane na osnovi monoklonskih protiteles. Prve študije o uporabi teh testov so določile njihovo visoko občutljivost, specifičnost in obljubo uporabe, predvsem v službi za transfuzijo krvi [25,26]. Nameščeno:

  • možnost določitve jedra Ag HCV v serumu ali plazmi;
  • specifičnost odkrivanja jedra HCV Core Ag;
  • prisotnost oseb s kirurškim antigenom v seronegativnem krvnem sevu za zdravljenje anti-HCV;
  • pogost (90,3%) odkrivanje Core Ag HCV v krvnem serumu s prisotnostjo anti-HCV in HCV RNA [25];
  • neposredna povezava med koncentracijo HCV RNA in odkrivanjem Core Ag HCV [25];
  • zmanjšanje faze "okna" - od trenutka okužbe do prvega pozitivnega rezultata odkrivanja anti-HCV. Ugotovljeno je bilo, da je HCV Core Ag mogoče odkriti v 83% primerov (n = 24) dan po prvem odkritju HCV RNA [26] in dolge (v povprečju 26 dni) pred pojavom anti-HCV [27].

    METODE DETEKCIJE HCV RNK. Sodobno fazo laboratorijske diagnostike hepatitisa C lahko označimo kot stopnjo začetka široke uporabe molekularnih bioloških metod za odkrivanje HCV RNA. Pretežna večina metod za odkrivanje nukleinskih kislin je bila preizkušena za odkrivanje HCV RNA. Načela izdelave diagnostičnih pripravkov in njihove uporabe za odkrivanje virusne DNA ali RNK so namenjena precejšnjemu številu pregledov literature, ki so objavljeni tako v domačih [28] kot tudi v tujih publikacijah [29]. Vse te metode je mogoče razdeliti na dve skupini, ki temeljijo na uporabi načel hibridizacije brez pomnožitve izbrane regije nukleinske kisline ali z njihovo ojačitvijo, kar bistveno poveča resolucijsko moč metode.

    Metoda hibridizacije ki temelji na kombinaciji označenih sond za hibridizacijo (gensko spremenjene ali sintetične molekulske strukture, ki vsebujejo nukleotidne sekvence, ki dopolnjujejo izbrana območja RNA). Rezultate upoštevamo z intenzivnostjo signala, ki prihaja iz oznake v sestavi nastalega kompleksa.

    Pri hepatitisu C je ta metoda odkrivanja HCV RNA najprej našla aplikacijo za njegovo identifikacijo neposredno v hepatocitih, pri testih, ki so bili označeni kot in situ hibidizacija [30]. Možnost neposrednega odkrivanja HCV RNA v tkivih je omogočila, da jo odkrijemo v mononuklearnih celicah, celicah slinavke in drugih tkivih bolnika s hepatitisom C [31, 32].

    Metoda hibridizacije, ki se uporablja za odkrivanje RNA HCV, omogoča, da dokaže prisotnost negativnih (replikativnih) verig HCV RNA, kar kaže na aktivno replikacijo virusa [33].

    Metoda verižne reakcije s polimerazo - trenutno najbolj razširjena metodična metoda, ki je osnova za skoraj vse molekularne biološke metode odkrivanja HCV RNA. Poleg tega je določitev HCV RNA možna tako v kvalitativnih kot kvantitativnih različicah, kar je še posebej pomembno pri imenovanju, spremljanju in ocenjevanju učinkovitosti uporabljene terapije.

    Glavne variante metode je mogoče opredeliti na naslednji način:

  • polimerazna verižna reakcija (PCR);
  • ligazna verižna reakcija;
  • NASBA;
  • TMA (transkripcijsko ojačena reakcija amplifikacije, ojačanje, posredovano s transcripacijami).

    Verižna reakcija s polimerazo - ki se pogosto uporablja v metodi odkrivanja HCV RNA v Rusiji in v tujini. Temelji na več cikličnem procesu, ki spominja na naravno replikacijo nukleinske kisline, pri čemer je vsak cikel sestavljen iz zaporednih stopenj.

    Iz preučevanega materiala (seruma ali plazme v krvi, jetrne biopsije) se sprosti HCV RNA. Glede na to, da je nukleinska kislina HCV predstavljena z RNA in za ojačanje, s pomočjo enzimske reverzne transkriptaze zahteva cDNA molekulo, se tvorijo enojnantne molekule cDNA HCV. V naslednjem koraku se v določeni del vsake verige HCV cDNA dodaja tako imenovana "cDNA". Primerji - kratki oligonukleotidi, ki dopolnjujejo znane nukleotidne sekvence. Primerjava primarne strukture regije 5'UTR genomov različnih izolatov HCV je pokazala, da je njihova nepomembna variabilnost (med genotipi, nukleotidno homologijo 92-98% in genotipom 98-99%). Zaradi tega je bilo bolje izbrati primere iz te cone HCV RNA in njihovo uporabo v diagnostičnih testnih sistemih, proizvedenih v naši državi in ​​v tujini.

    Nadalje, s pomočjo DNK odvisnega DNA polimeraznega encima, se sinteze novih delov DNA. Trenutno je vir tega encima najpogosteje uporabljajo thermophilus termus bakterije (TTH-polimeraze) ali thermophilus aquaticus (Taq polimerazo). S toplotno stabilnost v prisotnosti mangana in magnezijevih ionov, lahko encim se hkrati uporablja za sintezo komplementarnih enojnoverižne molekule HCV cDNA in pomnoževanje izbranih delov cDNA. Na zadnji stopnji posameznega reakcijskega cikla sinteza DNA sintetizira nove verige komplementarnih cDNA HCV. Večkratne ponovitve reakcijske ciklusa vodi do kopičenja HCV cDNA fragmentov, ki so lahko registrirane s poliakrilamidno gelsko elektroforezo, čemur sledi vizualno zaznavanje, ali s hibridizacijo z oligonukleotidnih sond, ki povečuje občutljivost in specifičnost diagnostičnih izdelkih. Uporaba praškov, označenih z encimi, omogoča zapisovanje rezultatov PCR z uporabo encimskega imunološkega testa.

    Stalni cilj raziskovalcev, ki oblikujejo diagnostične sisteme za odkrivanje HCV RNA, je povečanje občutljivosti in specifičnosti. Ta namen služi različica PCR, imenovana "ugnezdena PCR" [34]. Posebna značilnost te metode iz "klasične" je hkratna uporaba dveh parov začetnih premazov, od katerih je ena komplementarna povezana z notranjim območjem amplikona, pridobljenega po prvem krogu ojačitve. Hkrati se domneva, da ima ta različica PCR večje tveganje kontaminacije vzorcev, kar lahko privede do lažnih pozitivnih rezultatov [35].

    Akutna treba ugotoviti HCV RNA in težave, povezane s proizvodnjo velikega obsega zelo občutljivih in posebnih diagnostičnih kompletov za diagnostično PCR opredelila razširjeno uporabo izdelke, proizvedene v laboratorijih. Primerjava teh testnih sistemov, tako imenovani - preizkus "doma" ( "v hiši testov"), je pokazala svojo visoko variabilnost v občutljivosti in specifičnosti, kot tudi pomanjkanje ponovljivost rezultatov med laboratoriji in diagnostični preparati serije. Tako absolutno lahko pravilno identificiramo prisotnost ali odsotnost virusne RNA v vzorcih kontrolnih podatkih v prvem ciklu evropskega ugotavljanja kontrole "zunanje" kakovosti HCV RNA (1996) 136 laboratoriji le 22 (16%) [36]. Podoben rezultat so opazili v naši državi, v istem delovanje v okviru Zvezne nadzor zunanje kakovosti (2001), ko so bili 14 sodelujoči laboratoriji le 3 (21,4%) lahko pravilno rešitev problema. [37]

    Razlogi za lažno negativne in lažno pozitivne rezultate odkrivanja RNA s HCV so različni. Z lažno negativnimi rezultati:
    - izgubo ali uničenje HCV RNA v pripravi na odziv kliničnega gradiva;
    - prisotnost v vzorcu inhibitorjev, ki vplivajo na različne sestavine PCR. Te inhibitorje predstavljajo različne kemične ali beljakovinske snovi. Na primer: prisotnost zaviralcev reverzne transkriptaze v tekočini sperme ni omogočila odkrivanja RNA HCV in govora o možnosti izvajanja spolne poti prenosa hepatitisa C [38]; prisotnost hepaprina [39]; visoka stopnja krioglobulinov v krvnem serumu [40];
    - neupoštevanje termičnega režima skladiščenja in prevoza kliničnega gradiva. Z lažnimi pozitivnimi rezultati:
    - kontaminacija med vzorci (pri obdelavi vzorcev in / ali obdelavi z reakcijsko zmesjo), vključno z onesnaženjem s pozitivnim kontrolnim vzorcem;
    - onesnaženje s produkti pred ojačanjem (ampliconi), ki lahko kontaminirajo vzorce in raztopine s pomočjo aerosolov ali laboratorijske opreme.

    Masovna uvedba diagnostike PCR po definiciji RNA HCV je postavila telesa praktičnega zdravstvenega varstva nalogo prehoda na novo raven izvajanja laboratorijskih študij. Osamitev izoliranih območij za glavne faze PCR (za pripravo vzorcev, ojačanje, za upoštevanje rezultatov); Poseben komplet za vsako stopnjo reakcije laboratorijskih oblačil, avtomatskih pipet; obstoj standardnih diagnostičnih kompletov in, kar je najpomembneje, razpoložljivost visoko usposobljenega laboratorijskega osebja omogoča zmanjšanje ravni napačnih rezultatov.

    Izvor standardiziran nabor za HCV RNA ( "AmplicorTM HCV", "Roche Diagnostični sistemi") izdelan v 1993 letu. V preteklih letih so se razvili kompleti za odkrivanje RNA HCV, katerih glavni namen je povečati njihovo občutljivost in specifičnost. Pri oblikovanju "Amplicor TM HCV" uporablja več izvirnih metodoloških tehnik, ki omogočajo, da odkrijejo ali nad 100 kopij HCV RNA na ml., Kot tudi, da se ukvarjajo z morebitnimi primeri kontaminacije vzorcev in rešitev, ki se uporabljajo v napravi. Uporaba encima - amperazy in deziksiuridintrifosfata (dUTP) omogoča, da se uniči pri prvem pomnoževanja cikla od predhodnih aplikony katerih lahko pride do onesnaženja. Uničenje amperazy pozno prvega pomnoževanja cikla (pri 55 ° C) ne omogoča encim uničiti amplikonov izbrane kot tarče. Pomembna novost je bila uvedba notranjega nadzora. Pomen te inovacije obstoji v uvedbi vzorca v vsaki sekvenci take pomnoženega HCV RNA odseka, ki bodo kasneje ugotovili ob uporabi primernih začetnih oligonukleotidov v reakciji pomnoževanja v istem načinu. Odsotnost pozitivne reakcije pri odkrivanju notranje kontrole kaže na lažno negativno reakcijo na prisotnost HCV RNA v vzorcu. Diagnosticum naslednje generacije drog smo označili - "HCV Amplicor 2,0 ', ob uporabi meje občutljivosti, ki ima 50 molekul HCV RNA.

    Sistem HCV RNA z uporabo "Roche" nizov podjetja ni mogoče obravnavati ločeno od svoje merilne naprave, določa visoko kakovost testiranja. Razvijalci metode si prizadevajo popolnoma avtomatizirati vse faze reakcije. Sinonim te ideje je sistem "COBASAmpliPrepTM", ki omogoča, da v celoti avtomatizirati postopek pridobivanja HCV RNA, pomnoževanje in detekcijo, s čimer se zmanjša nevarnost lažno pozitivni in lažno negativna, medtem ko ohranja visoko občutljivost in specifičnost [41].

    Ligazna verižna reakcija detekcije RNA BGC (LCR). Metoda temelji na sposobnosti encima "DNA-odvisna DNA ligaza", da prekriva povezavo (ligat) fosfodiesterne vezi v DNA v prisotnosti ionov ATP in Mg 2+. Kot pri "klasičnem" PCR za odkrivanje HCV RNA, je prva stopnja LCR transverzalna reakcija, da dobimo cDNA HCV. Nadalje, DNA ligaza veže dva para primerjev (ki dopolnjujeta 5 'nekodirano regijo HCV RNA), ki sta še dodatno pomnoženi. Detekcija izdelkov za ojačenje LCR poteka ob upoštevanju reakcije antigenovega protitelesa. Vsaka od dveh primerjav je označena z različnim haptenom. Prvo od teh ujamejo protitelesa, adsorbirana na mikrodelce. Po postopku pranja z uporabo drugega para protiteles, označenih s fluorescentno etiketo, selektivno interagirajo s haptenom v proizvodu za ojačitev, čemur sledi reakcija substrata in ob upoštevanju fluorimetra.

    Občutljivost te metode je približno 200 kopij HCV RNA v ml, kar omogoča, da se ga uporabi za reševanje različnih kliničnih in diagnostičnih težav [42]. Trenutno diagnostični kompleti za odkrivanje HCV RNA, ki temeljijo na LCR, proizvaja Abbott.

    Nukleinske kisline Seaquencence ojačanje - NASBA -metoda detekcije HCV RNA temelji na sočasnem delovanju treh encimov: reverzna transkriptaza virusa aviarne mieloblastoma, RNAseaze H in RNA polimeraze T7 [43]. V nasprotju z RT PCR se reverzna transkripcija HCV RNK v prvi fazi ne izvaja. S pomočjo uporabljenih encimov je mogoče v 90 minutah pridobiti več kot 10 (9) kopij HCV cDNA mesta [44]. Sposobnost reakcije pri nizkih temperaturah (+41 C) močno poenostavlja delovanje in omogoča opuščanje opreme, ki zagotavlja ciklične spremembe pri visokih temperaturah. Rezultate reakcije upoštevamo z elektrokemiluminiscenco. Kljub temu, da je občutljivost NASBA blizu RT PCR, metoda ni pogosto uporabljena za odkrivanje RNA s HCV. Trenutno se razvija različica metode, ki združuje načela NASBA in "Real RT RT PCR".

    Metoda transkripcije posredovane ojačitve (TMA) se razlikuje od PCR in LCR predvsem v tem, da so fragmenti HCV RNA neposredno pomnoženi in ne cDNA HCV. V začetni fazi reakcije je primerek (št. 1) pritrjen na HCV RNA in s pomočjo encima (reverzna transkriptaza) sintetiziramo kopijo ciljne molekule, cDNA. Reverzna transkriptaza, ki ima tudi aktivnost RNase-H, uniči virusno RNA v hibridu RNA-cDNA. Nato je na molekulo cDNK pritrjen drugi primer, ki mu sledi dokončanje dvojne verižne DNA z reverzno transkriptazo. Z uporabo drugega encima nastane RNA polimeraza, transkripcija RNA s cDNA, kar ima za posledico nastanek 100 do 1000 kopij amplikona HCV RNA v enem samem reakcijskem ciklu. Primer št. 2 je pritrjen na te RNA-apilikone z nadaljnjo sintezo kopij cDNA in uničenje molekule RNK. Dodajanje praška št. 1 k cDNA, ki ji sledi dokončanje dvojno verižne DNA, sproži naslednji krog ojačitve. Rezultate reakcije upoštevamo pri lumenometru, saj nastali amplikoni RNA posebej interagirajo z DNA sondami, označenimi s kemiluminaporo.

    Kot prednosti metode TMA pri odkrivanju HCV RNA se opazi:

  • reakcija pri nižjih temperaturah v primerjavi s PCR;
  • nastajanje večjega števila amplikonov v enem reakcijskem ciklu, kar zmanjšuje čas, potreben za doseganje končnega rezultata (30-40 minut), in povečuje občutljivost reakcije (50 kopij / ml) [45].
  • zmanjša tveganje kontaminacije, saj je RNA manj stabilna kot DNK.

    Primerjalne študije o odkrivanju HCV RNA s TMA in drugimi metodami so pokazale visoko stopnjo naključnosti rezultatov [45].

    Kombinacija načel hibridizacije in ojačanja temelji na metodi odkrivanja HCV RNA, označene kot "Metoda hibridizacije z uporabo razvejanih sond ali testa razvejane DNA (bDNA) [46]. Za razliko od PCR v tem testu, pomnoževanje ne vključuje molekul HCV cDNA, ampak signala. Reakcijo izvedemo v plošče s 96 vdolbinicami, pri kateri se adsorbirajo fragmenti HCV RNA iz 5 'neprevedene regije in temeljnega gena HCV RNA. Zaradi kasnejša vezave s sintetično DNA molekulo razvejen in hibridizacijo z sonda označena z ojačevalnikom alkalne fosfataze in naknadno encimske reakcije dosežemo z močnim povečanjem sprejetega signala. Trenutno diagnosticums tretje generacije diagnostike trgu (Bayer 3,0 Hepati-tis C virusna RNA kvantifikacije ga Brna), ki ima občutljivost za prepoznavanje 520 ie / ml (2500 izvodi HCV RNA).

    KVANTITATIVNO DETEKCIJA HCV RNA. Za oceno koncentracije HCV RNK se uporablja kvantitativna varianta PCR. Sprva je koncentracija HCV RNA poskušali karakterizacijo ordinal vrednosti, kot so "+", "++", itd, vizualno odbojno jakost pasove, dobljene z elektroforezo ojačanja proizvodov ali z omejitvijo redčenje, to je zaradi prisotnosti pozitivnega rezultata v končni titracijsko točko. Težave standardizirati vse korake PCR ne omogočajo objektivno oceniti koncentracijo HCV RNA, ki vodi do večjih napak razlago rezultatov.

    Trenutno rezultatov raziskav izraženi kvantitativno: število kopij HCV RNA vsebuje 1 ml absolutnega ali logarifmeticheskom (log 10).. Glede na dejstvo, da je koncentracija HCV RNA odkritih odraža število virusnih delcev, je ta številka besedilu "virusa ekvivalent (eq)", z dodajanjem predpone k (kilo tisoč) ali M (ppm). Drug način za izražanje števila virusnih delcev so njihovi masni ekvivalenti. Na primer, v gramih ali pikogramih (1 pg ustreza približno 1 milijonu ekvivalentov). Raznolikost uporabljenih količin otežuje interpretacijo rezultatov, pridobljenih v različnih laboratorijih. Zato je strokovni odbor za biološki standardizacijo je "mednarodni referenčni material", ki vsebuje HCV RNA (serumski liofilnovysushennaya krvi, ki vsebuje HCV RNA genotip 1), je koncentracija, ki izražen v mednarodnih enot (IU / ml) [47]. Posebni dejavniki nam omogočajo preračunavanje pridobljenih vrednosti koncentracije v mednarodne enote.

    Za določanje koncentracije HCV RNA se uporabljajo skoraj vse variante PCR. Kjer diagnostični formulacije izpolniti vrsto posebnih zahtev, od katerih je najbolj pomembno, je strogo Rezultati linearnost, tj povečanje signala odkrite reakcije s povečanjem koncentracije HCV RNK v testnem vzorcu. Uporaba notranjih standardov z različno vsebnostjo HCV RNA se izogiba številnim metodološkim napakam, ki lahko vplivajo na končni rezultat reakcije [28]. Občutljivost uporabljena za diagnostiko (Amplicor HCV Monitor v2.0; LCX HCV RNA kvantitativnega testa) lahko zazna HCV RNA se začne pri 50 kopij na ml [48,49], kar je še posebej pomembno za napovedovanje učinkovitost protivirusnega zdravljenja izbranega iz.

    PCR v realnem času ("Real RT RT PCR") -ena od najbolj obetavnih možnosti za kvantitativno metodo za odkrivanje HCV RNA. Metodo in njegovo strojno opremo razvijajo specialisti Roche in Percin Elmer. Načelo metode je sposobnost hidrolizirati sekvence cDNA v smeri 5 '---- 3'. V reakciji se uporablja posebna sonda, označena z dvema fluorescenčnima barvama s tesno absorpcijo in maksimalno fluorescenco. V prisotnosti izdelkov za ojačitev Tag-polimeraza cepi sondo, ki preprečuje prenos energije iz ene molekule barve v drugega in s tem preprečuje sproščanje kvantne svetlobe. Posebna naprava upošteva reakcijo in matematično modeliranje fluorescenčne kinetike na vsaki stopnji reakcije, kar omogoča pridobivanje informacij o začetni koncentraciji HCV RNA.

    Posebna značilnost PCR v realnem času je zmožnost pridobiti informacije o prisotnosti HCV RNA neposredno v reakcijskem procesu, kar omogoča zmanjšanje časa analize v kombinaciji z visoko občutljivostjo in linearnostjo dobljenih rezultatov [50]. Po besedah ​​Tatiana Yashina in soavtorjev ta metoda omogoča odkrivanje 200 kopij HCV RNK v ml. [51].

    METODE GENOTIPIRANJA RNA VHC. Določitev pripadnosti HCV določenemu genotipu in podtipu je našla rešitev za reševanje ne le čisto znanstvenih, ampak tudi praktičnih vprašanj. Na primer: iskanje viru okužbe med izbruhi hepatitisa C ali napovedovanje učinkovitosti uporabljene terapije.

    "Zlati standard" genotipizacije HCV je neposredna določitev primarne strukture HCV RNA s svojo naknadno filogenetsko analizo [52], kar omogoča jasno opredelitev tega izolata virusa. Te podatke lahko dobite z naslednjimi možnostmi zaporedja:

  • neposredno;
  • ki temelji na standardnem kloniranju;
  • zaporedje izdelkov PCR reakcije (omejeno zaporedje).
    Kljub natančnosti rezultata se neposredna zaporedna metoda zaradi tehničnih težav pri izvajanju raziskav in visokih stroških dela ne uporablja v praktičnem zdravstvenem varstvu. Hkrati je razpoložljivost informacij o primarni strukturi HCV RNA referenčna metoda genotipizacije in razpoložljivost avtomatskih zaporednih naprav poenostavlja rezultate.

    Trenutno se v večini primerov za genotipizacijo HCV RNA uporabljajo metode, ki temeljijo na uporabi PCR s tipsko specifičnimi primerji. Prvo genotipizacijo HCV RNK je opravil N. Okamoto et al. Leta 1992 je z RT-PCR [53], ki vključuje dva koraka ojačanja. Prvi je bil izveden z univerzalnimi primerji za vse genotipe HCV, drugi z mešanico tipsko specifičnih primerjev, da bi dobili specifične izdelke za ojačitev različnih dolžin. Prisotnost določenega genotipa je bila ocenjena glede na velikost ojačenega produkta. Kot primerji se uporabljajo tipske sonde, informacije o katerih se nahajajo v 5'UTR, Core ali NS5 regijah RNKVS [54].

    Hibridizacijo pomnoženih izdelkov z gensko specifičnimi sondami adsorbira (od 5 'neprevedene regije HCV RNA), adsorbirane na nitrocelulozno membrano, leži na podlagi testa - označena "INNO-Lipa HCV, INNO-GENETIKA" [55]. Sprva je s pomočjo teh testnih upravljanih vnesli genotipi: la; lb; 2a; 2b; 3a; 3b; 4 in 5a. Nato test sistem 2. generacije "INNO-Lipa HCV II INNOGENETICS" omogoči razlikovanje vseh genotipov 6 in nadaljnje 2c; 2d; 2i; 3c; 4a-h; 6a in 10a. [56]

    Metodološki arzenal genotipizacije HCV ni omejen na zgornje metode in vključuje različne metode:

  • genotipizacija, ki temelji na analizi omejitvenih profilov ojačanih produktov (RFLP). Produkti za ojačitev fragmentov HCV RNA (regija 5'UTR-regija ali NS5 HCV RNA) se razgrajujejo z restrikcijskimi encimi. Oblikovani fragmenti se razlikujejo po dolžini, odvisno od omejitvenih mest, na katerih se razcepi. Rezultati elektroforeze in njihova primerjava omogočajo identifikacijo HCV genotipa v testnem vzorcu [57]. Primerjava rezultatov genotipizacije z metodo PCR-RFLP s sekvenčnimi podatki je pokazala visoko stopnjo naključnosti rezultatov - 95% [58].
  • genotipizacija na osnovi metode SSCP (ocenjevanje konformacijskega polimorfizma enostranskih DNA fragmentov). 5-neprevedena regija HCV RNA, ki ima minimalen niz nukleotidnih razlik, ki razlikujejo medsebojne genotipe, je bil izbran kot predmet študije. To dejstvo določa možnost uporabe skupnih primerjav za genotipizacijo [59].

    SEROTIPIRANJE Anti-HCV Raziskave je bilo možno zahvaljujoč P.Simmonds sod ugotavljanje prisotnosti protiteles, usmerjenih k epitopov genotipspetsifichnym katerem informacija kodirana NS4 HCV RNA v coni [60]. Z diagnosticum za ELISA zgrajena na osnovi sintetičnih peptidov, ki so sposobni razlikovati primere hepatitisa C, ki jo povzročajo virusi 1, 2 in genotipu 3 (89% ujemajo z rezultati genotipizacije) povzročili. Razvoj testsistem uporabo sintetičnih in rekombinantnih antigenov ga kodira NS4 in osrednja območja HCV RNA pospešilo seznama ga ni mogoče tipizirati virus variante in prisotnost sodnik podtipe (1a, lb, 2a, 2b, V in 4a) [61,62]. Trenutno je komercialno sprostitev diagnostičnih priprav serotipizacij pri izvedbi promptno ELISA - "NA Mureh 1-6 Serotipizacija testu MUREX Diagnostika«, in v izvedbenem "imunoblot" - riba HCV serotipizacij testu Chiron Diagnostics. Primerljive rezultate podatki serotipizacije in genotipizacije HCV RNA so pokazale visoko stopnjo dogovora rezultatov dosegla 95% [62].

    Serotipizacija anti-HCV v primerjavi z genotipizacijo HCV RNA ima take prednosti, kot so preprostost reakcije in nižji stroški. Hkrati ta metoda v nobenem primeru ne more nadomestiti genotipizacije. Rezultati serotipizacije anti-HCV pričajo o vrsti anti-HCV v trenutni ali prej preneseni okužbi. V nekaterih primerih (najpogosteje pri bolnikih s hemofilijo) je zabeleženo sočasno odkrivanje anti-HCV različnih podtipov, kar lahko kaže na večkratno okužbo z različnimi podtipi in genotipov HCV [63]. Poleg tega je pri bolnikih s hepatitisom C na ozadju izrazitega stanja imunske pomanjkljivosti lahko edini marker RNA, zaradi česar ni mogoče izvesti serotipizacije.

    OCENJEVANJE IN VKLJUČITEV REZULTATOV PRESKUŠANJA ZDRAVSTVENIH OZNAKE ZDRAVLJENJA HCV. Široka paleta seroloških označevalcev trenutne ali prejšnje okužbe s HCV, kot tudi sodobni metodološki okvir lahko rešili veliko težav v laboratorijski diagnostiki in preprečevanje hepatitisa C. Tabela 2 prikazuje število seroloških označevalcev za okužbe s HCV in najbolj pomembna področja njihovega testiranja.

    Tabela 2
    Diagnostični pomen markerjev sedanje ali predhodne okužbe s HCV

    Pregledovanje
    v službi
    kri

    Potrditev
    na
    rezultat
    + anti-HCV

    Ena glavnih nalog laboratorijske diagnoze hepatitisa C je diagnosticiranje in ločevanje akutnega kroničnega hepatitisa C z identifikacijo seroloških označevalcev okužbe. Kot pri drugih akutnih virusnih hepatitisih se serološki označevalci okužbe s HCV dosledno pojavljajo in izginejo ob toku okužbe in procesu okrevanja (slika 2).

    HCV RNA se lahko odkrije 7-21 dni po okužbi s HCV in anti-HCV na dan 20 do 150 (v povprečju 50. dan) [64]. Spekter anti-HCV se lahko razlikuje glede na obdobje akutnega hepatitisa. Verjame se, da prvi odkrije protitelesa, ki jih kodirajo Core in NS5 v regiji HCV RNA. Anti-HCV za beljakovine, ki jih kodira območje NS4, ni prisoten v akutni fazi hepatitisa C [65]. Primerjalna študija ravni koncentracij anti-HCV, spektra anti-HCV in HCV RNA pri bolnikih z akutnim in kroničnim hepatitisom je pokazala nekatere razlike [66]. Po našem mnenju so te razlike povezane s posameznimi značilnostmi nalezljivega procesa, kar zmanjšuje njihovo diagnostično vrednost.

    Sl. 2. Akutni hepatitis C

    Po analogiji z laboratorijsko diagnostiko hepatitisa A in B, se pričakuje, protitelesa proti HCV IgM razreda bo tako velika kot diagnostična vrednost IgM anti-HAV in IgM anti-HBc. Vendar ti testi serumov pacientov z akutno in kroničnim hepatitisom C v prisotnosti IgM anti-HCV navedejo svoje pogoste identifikacijo med temi bolniki - 50-93% oziroma 50-70%, soodvetno [67,68], ti rezultati kažejo, da je odkrivanje IgM protikonkurenčnega -VGS ni mogoče uporabiti kot označevalec akutne okužbe s HCV.

    Odsotnost označevalca, ki trdi, da je "zlati" standard akutnega hepatitisa C, določa potrebo po celoviti oceni dobljenih rezultatov na podlagi dinamičnega opazovanja bolnika.

    Podobno pomembno področje uporabe zelo občutljivih metod za testiranje HCV RNA - zmanjšanje tveganja za posttransfuzijski hepatitis C. Potreba po takih delih je odvisna od prisotnosti faze "oken", tj. čas med prvim odkrivanjem RNA HCV in pojavom anti-HCV ter obstojem krvodajalcev (bolniki s kroničnim hepatitisom C), ki imajo HCV RNA v odsotnosti anti-HCV. Sedanji sistem spremljanja krvnih darovanj za HCV vključuje samo testiranje anti-HCV, tveganje za nastanek hepatitisa C pa ostaja. Glede na to je legitimno postaviti vprašanje preizkušanja krvi za prisotnost HCV RNA s sodobnimi metodami (Metode NAT so "preskus pojačanja nukleinske kisline"). Dejavnik, ki omejuje to delo, je visoka cena raziskav. Da bi zmanjšali stroške, je priporočljivo testirati skupino krvnega seruma (od 8 do 96 vzorcev) z naknadnim iskanjem pozitivnega vzorca v primeru odkrivanja HCV RNA v bazenu serumov. Ob upoštevanju faktorja redčenja želene HCV RNK, ko so krvni serumi napihnjeni, je vprašanje uporabe najobčutljivejših detekcijskih metod najpomembnejše. Menimo, da lahko uporaba diagnostičnih kompletov za NAT - s senzitivnostjo 50-100 IU / ml znatno zmanjša tveganje za posttransfuzijski hepatitis C.

    Nedvomno je seznam vprašanj, ki jih je mogoče rešiti pri testiranju celotnega spektra markerjev okužbe s HCV, omejen na ta dva področja. Razpoložljivost sodobnih testnih metod v kombinaciji z znanjem o njihovih zmožnostih odpira široke možnosti za znanstvene in uporabne raziskave o hepatitisu C.

    • Share Tweet Pin it
    Prejšnji Članek

    Hepatoza med nosečnostjo

    Naslednji Članek

    Kaj povečuje število nevtrofilcev v krvi pri odraslih

    Sorodni Članki Hepatitis

    Napajanje

    Kronični hepatitis: kaj storiti, znaki, diagnoza, kako zdraviti bolezen in preprečiti

    Napajanje

    Zakaj krvni test za sterilnost

    Napajanje

    Nato je treba očistiti jetra - od toksinov in žlindre. Pripravki in ljudska pravna sredstva.