Kaj je analiza PCR in virusno obremenitev?

Share Tweet Pin it

Verižna reakcija s polimerazo (PCR) je laboratorijska metoda za določanje DNA in RNA. Prvič je bila testirana pred skoraj pol stoletja ameriški Cary Mullis. Ta preobčutljivi test lahko določi nosilec genom iz ene izvorne molekule, ki jo vsebuje krvna slinavka, slina ali koža.

Metoda PCR ima velike možnosti, najde aplikacijo ne samo v medicini, temveč tudi v genskem inženirstvu in v kriminalističnih dejavnostih. S svojo pomočjo, kloni in ustvarjanje novih vrst DNK, določi stopnjo sorodnosti. Na kosu epitelija, ki ga najdemo na kraju zločina, vzpostavi kriminalca.

Analiza PCR za hepatitis - kaj je to in zakaj to počnejo?

Zakaj je potrebna analiza PCR za sum, da je hepatitis C, kaj je to?

Virus hepatitisa C - RNA, ki vsebuje virus, ima 6 genotipov in do 500 podtipov. Od vseh hepatitisov ima ta virus najvišjo sposobnost mutacije in premaga zaščitni pregrad imunskega sistema. Od skupnega števila primerov hepatitisa je virus C povzročil 70% kroničnih primerov in 30% ciroze in jetrnega raka.

Bistvo metode: del gena, ki se preiskuje s pomočjo posebnih encimov in pogojev, se mora razmnožiti v epruveti. PCR analiza omogoča določanje seva virusa, brez katerega ni mogoče učinkovito zdraviti: vsak genotip je različno občutljiv na protivirusna zdravila. Obstajata dve vrsti PCR:

Protivirusna terapija potrebuje stalno spremljanje, da bi pravočasno popravljala zdravljenje, se za te namene uporablja tudi polimerazna verižna reakcija.

Kvalitativni in kvantitativni PCR

PCR kvalitativno na hepatitisu C odgovarja: ali je v bolnišnici kri sev virusa C in kateri. Genotipizacija je potrebna za razjasnitev diagnoze, prognoze bolezni in določitev časa zdravljenja.

Glede na sprejeto razvrstitev je gen označen s številko, podtip pa se označi z majhno latinsko črko.

Posebno zdravilo, ki temelji na naravnih snoveh

Cena zdravila

Predlogi za treatment

Prvi rezultati se čutijo po tednu jemanja

Več o pripravi

Le enkrat na dan, po 3 kapljice

Navodila za uporabo

Dekodiranje tabele genotipov virusa C:

  • Genotip 1a, 1b, 1c
  • Genotip 2a, 2b, 2c, 2d
  • Genotip 3a, 3b, 3c, 3d, 3e, 3f
  • Genotip 4a, 4b, 4c, 4d, 4e, 4f, 4g, 4h, 4i, 4j
  • Genotip 5 a
  • Genotip 6a

Najpogostejši genotipi so 1,2,3. V Rusiji so 1a, 1b, 2 in 3 sevi virusa C.

Genotip 1b težje drugo obdelovalno pri 90% postane kroničen, ki so 30% preoblikuje v raka ali cirozo.

Genotipi 2a in 3a imajo stopnjo kronizacije 33-50%, bolj odzivajo na protivirusno terapijo.

Pri potrditvi prisotnosti virusa je PCR količinsko opredeljen za hepatitis C, ki izračuna število molekul RNK v laboratorijskem vzorcu bolnika.

Pojasnilo analize

Kvalitativni PCR analiza ima dva odgovora:

PCR negativen pomeni, da patogen v vzorcih krvi ni zaznan.
Pozitivno odgovor kaže na nasprotno: RNA enega ali drugega genotipa virusa S.

Verjetnost zanesljivosti rezultata je 95%. Preostalih 5% je napaka zaradi napake osebe. Ta možnost je dovoljena zaradi visokih zahtev za izvedbo raziskave:

  • pravila za shranjevanje reagentov;
  • ustrezno usposobljenost medicinskega osebja;
  • čistost biomateriala.

Sam komplet PCR ima 100-odstotno diagnostično natančnost.

Kvantitativni PCR RNA hepatitisa C vam omogoča, da določite virusno obremenitev pacienta. Uporaba:

  • določena je stopnja bolezni (akutna, kronična);
  • določi učinkovitost protivirusnega zdravljenja;
  • potrebo po biopsiji jeter razjasnjujemo.

V nekaterih primerih bolnik ne čuti nikakršnih znakov bolezni, medtem ko metoda PCR kaže okužbo s HCV. To pomeni, da je bolezen v zgodnji fazi razvoja ali v kronični obliki. Da bi razjasnili diagnozo, je potrebno več raziskav, da bi čim prej začeli z virusom protivirusnega zdravljenja.

Virusna obremenitev pri hepatitisu C

Virusna obremenitev kaže na aktivnost jetrnega virusa, kako aktivno poteka njegovo razmnoževanje.

Kaj je to?

Kvantitativni PCR hepatitisa C se meri v mednarodnih enot na 1 ml ali IU / ml, kar kaže na to, koliko proučevali v 1 ml krvi Zaznali RNA kopij določenega sevom virusa S.

Kaj je visoko, kaj je nizko?

Analiza za virusno obremenitev omogoča ugotavljanje prisotnosti virusne RNK v koncentraciji 50 IE / ml. Virusna obremenitev je normalna - to je, kadar PCR ne zazna nobene ene molekule HCV RNA.

Tabela virusne obremenitve:

  • nizka koncentracija od 600 ie / ml 3 * 104 ie / ml;
  • povprečna koncentracija od 3 x 104 ie / ml do 8 x 105 mm;
  • Visoka - raven več kot 8 * 105 ie / ml.

Nizka virusna obremenitev - to je znak, da je terapevtsko zdravljenje pravilno izbrano, in napoved za zdravljenje hepatitisa C je ugodna.

Visoka koncentracija virusnih celic kaže, da je bolezen v akutni fazi. Bolnikova kri je nevaren vir okužbe.

Virusne kazalniki obremenitve, ki so v povprečju na ravni, označen s kronično fazo sanitarne vode, ali lahko dva trende razvoja: njegovo povečanje ali zmanjšanje.

Na koncu - v 6 mesecih je bil kontroliran PCR.

Stroški diagnostike PCR

Naslednji simptomi bi morali vznemiriti:

  • splošna šibkost;
  • sprememba barve kože, očesne sklerje, izcedek;
  • slabost;
  • zmanjšan apetit;
  • bolečine v mišicah in sklepih;
  • težo v desnem hipohondriju;
  • povišane ravni AST in ALT v krvi.

V stiku z okuženimi bolniki je v predoperativnem obdobju priporočena tudi hemodializa za pregled.

Javne klinike opravljajo krvno testiranje za PCR brezplačno, če obstaja napotitev strokovnjaka za nalezljive bolezni ali hepatologa.

Plačane storitve za PCR diagnostiko so na voljo v vseh večjih ruskih mestih. Stroški so odvisni od vrste testa, razpoložljive opreme, časa in drugih dejavnikov.

Kakovostna analiza PCR v Moskvi in ​​Sankt Peterburgu bo stala od 600 do 900 rubljev. V regijah - od 300 do 800 rubljev.

Opredelitev virusnega bremena hepatitisa C bo stala 17.000-22.000 rubljev. Za druge vrste okužbe je cena kvantitativne študije 1200-10000 rub.

Prednosti in slabosti metode PCR

Katere so prednosti metode polimerazne verižne reakcije nad drugimi diagnostičnimi metodami?

  1. Široka paleta aplikacij. Z uporabo standardne opreme PCR lahko identificiramo katerikoli virus.
  2. Natančnost odkrivanja patogena. Z uporabo različnih kombinacij encimov in analiznih tehnik je dosežena 100% specifikacija študije za navedeno okužbo.
  3. Visoka občutljivost. Tehnika omogoča odkrivanje prisotnosti ene molekule virusa v krvi.
  4. Učinkovitost. Kvalitativna analiza je pripravljena v nekaj urah, kvantitativno - po dveh dneh.
  5. Diagnoza virusa v inkubacijskem obdobju. V PCR se patogen določi ne s prisotnostjo protiteles, če že obstaja imunski odziv telesa, vendar pred začetkom patološkega procesa, ki olajša zdravljenje.

Slabosti PCR so posledica njegovih prednosti:

  • Čistost testa zahteva najvišjo stopnjo čistosti, vključno z zrakom v laboratoriju, tako da "tuje" DNK ne vstopi v vzorec;
  • visoke zahteve za osebje, izvajanje vzorčenja in analize biomateriala.

Kvantitativni PCR

Kvantitativni PCR (kvantitativni PCR, qPCR,) je kvantitativna verižna reakcija v polimerazi v realnem času (qPCR).

Kvantitativni PCR (grški. polimerov - sestavljena iz več delov, raznolika; lat. ponovno Predpono, ki kaže ponavljanje dejanja, in actio - delovanje) je varianta PCR, v kateri se kinetika reakcije stalno beleži, kar omogoča količinsko določanje vsebnosti nekaterih nukleotidnih zaporedij DNK v kompleksni mešanici molekul.

Prvo različico te metode je predlagal P. Holland et al. leta 1991 (metoda "TaqMan"). V skladu s protokolom v reakcijski zmesi Poleg običajnih dveh primerjev dodamo oligonukleotidno sondo, označeno na 5 'koncu in fluoroforom, ki obsega v svojem osrednjem delu ali 3'-fluorescenčno dušilca ​​ki anneals v vsakem ciklu reakcije z amplikona osrednjega dela (2) med njenimi dvema pomnožili prašičev. Sonda se ne uporablja kot primer, saj je 3-terminalna hidroksilna skupina blokirana z ortofosfatom. Med reakcijo, termostabilno Taq polimerazo premakne sondo iz duplex, nato pa zaradi svoje 5'-3 'eksonukleaza cepi aktivnosti njena 5'-terminalni nukleotid označeni s fluoroforom. Višja koncentracija pomnoženih nukleotidnih zaporedij v reakcijski zmesi manjša je potrebno število ciklov do intenzitete fluorescence sproščenih fluorofori v vzorcu presegla bazalno raven prostega sonde z dušilcem. Od tega trenutka (število prag cikla), postane mogoče opazovati resnične kinetiko kopičenje fluorofora v reakcijski zmesi.

Z uporabo kvantitativnih metod PCR se odkrijejo kvalitativne spremembe v genih: točkovne mutacije, brisanje in vstavki. Vendar pa pri nekaterih dednih boleznih nastanejo ustrezni simptomi kot odgovor na spremembo odmerka določenih genov.

Tipičen primer dedne bolezni s spremembo v številu kromosomov izvodov dela 21 v človeškem genomu je povzročil, je Downov sindrom. Citogenetski ta bolezen lahko diagnosticiramo s trisomijo kromosoma 21, ali s prisotnostjo velikih prenose tega kromosoma na drugi strani, proti prisotnosti dveh normalnih kromosomov 21. kliničnih primerov Downovega sindroma, pri katerih ni vidnih sprememb v kariotip. To je posledica podvajanja majhnega dela kromosoma 21. Identifikacija takih mutacij ni mogoča pri tradicionalnih citogenetskih metodah. Vendar pa uporaba kvantitativnega PCR določitev 1,5-kratnega povečanja odmerka ustrezne regije kromosoma 21 postane zelo realna.

Za izvajanje kvantitativne PCR je značilna dve značilnosti. Najprej smo PCR izvedemo v prisotnosti dezoksiribonukleozid trifosfati ali oligonukleotidnih z radioaktivno ali fluorescenčno oznako označeni, da se natančno določi količino produkta PCR oblikovano. Drugič, med reakcijo PCR je potrebno prekiniti dovolj zgodaj, dokler ni preveč produktov PCR. To je posledica dejstva, da v končni fazi nasičenja pri PCR produkti postanejo preveč, presnove omejuje deluje kot substrat (dezoksiribonukleozid trifosfati), in encim sam, za molekule, ki postane preveč matrične DNA v produkta PCR. V takšnih okoliščinah je dokončanje drugega cikla PCR ne spremlja podvojitev števila produktov PCR in poteka izravnavanje majhne kvantitativne razlike med različnimi vzorci, ki jasno prikažejo dovolj v zgodnjih fazah po prehodu več reakcijskih ciklov.

Prvotni Postopek identifikacije delecij, ki so heterozigotna ali lokalizirano v avtosomne ​​genov, ki temelji na uporabi DNA kot matrice za PCR cDNA z reverzno transkripcijo iz mRNA ali ektopična iz mRNA, izolirane iz tkiv, ki izražajo gen celic pacienta ali kulture pripravljene. Za razliko od običajnih homolog, mutantna molekula v cDNA delecijo eksonov, ki mejijo na približne. Če so oligoprimer za PCR izbrana iz zaporedij teh regijah gena mutiranega cDNA bo služil le kot predlogo za razširitev majhno območje med temeljnimi spremljevalni delecijo eksonov. V običajni cDNA sekvenci je lahko to območje preveliko, da se ojačanje lahko prenese. V praksi za odkrivanje heterozigotov dalj intragenic oddelke multiplim PCR izvedemo z uporabo oligoprimer sistem zagotavlja pomnoževanje fragmentov popolnoma pokrivajo celotno cDNA molekula. Prisotnost brisanja je zabeležena z videzom izdelkov za ojačanje nenavadnih velikosti.

Glej tudi reverzno transkripcijo - polimerazno verižno reakcijo v realnem času.

Slovar izrazov o biotehnologiji. Tarantula: Indeks Ligation metode "v soseščini" blizu metoda ligacija (pro-ximity podvezovanje test, PLA) Molekularna svetilniki (molekularne svetilniki) točkovne mutacije: opredelitev metod za odkrivanje znanih metodah mutacij

Diagnostika PCR omogoča ne samo ugotavljanje prisotnosti virusa hepatitisa B v krvi in ​​njegovo etiologijo, temveč tudi ovrednotenje njegove aktivnosti. Detekcija virusnega bremena je še posebej pomembna za izbiro učinkovitega zdravljenja, če je previsoka, se verjetnost izterjave zmanjša. Kaj je bistvo polimerazne verižne reakcije?

Bistvo PCR diagnostike

Ko se hepatitis izvaja s PCR, da bi se prepričali o diagnozi. Z uporabo te metode je mogoče odkriti DNA virusa in določiti njegovo količino v krvi.

DNA virusa v krvi s PCR pri hepatitisu mogoče opredeliti na koncu obdobja inkubacije, je mogoče opredeliti tokrat v luči povečanih koncentracij transaminaz HBsAg, potem je HBeAg.

S kvalitativno definicijo lahko natančno določite diagnozo, obstaja hepatitis ali ne. Običajno mora biti DNA virusa v krvi odsoten. Kvantitativna metoda omogoča določanje intenzivnosti bolezni in reprodukcije virusa.

Analiza ima zelo visoko občutljivost in zanesljivost. Kot biološki material se odvzame venska krv. Zahvaljujoč sodobnim tehnologijam, lahko PCR zazna virus v koncentraciji 5 × 103-104 kopij / ml v krvi. Na podlagi rezultatov analize, poznavanja norme, lahko ocenite virusno obremenitev in napišete napoved za zdravljenje.

Pomembno! DNK virusa, ki spodbuja razvoj ciroze in drugih kroničnih bolezni jeter.

Odkrivanje DNA s PCR je potrebno v naslednjih primerih:

Dvomi v končno analizo po opravljenem preskusu. Opredelitev akutne stopnje bolezni. Odkrivanje latentnih oblik hepatitisa. Ocena učinkovitosti po protivirusni terapiji.

Kako dešifrirati rezultate, pridobljene po PCR diagnostiki?

PCR kvantitativno

S kvantitativno oceno lahko ugotovite samo prisotnost virusa, pa tudi ugotovite virusno obremenitev, če PCR kaže pozitiven rezultat.

Kvantitativna metoda je potrebna za ugotovitev takih informacij:

Intenzivnost bolezni. Učinkovitost zdravljenja. Razvoj odpornosti na protivirusna zdravila.

Kvantifikacija je zelo pomembna pri diagnozi kroničnega hepatitisa. V tem primeru vsi kazalniki ne bodo v mejah norme. Stopnja transaminaze se bo povečala, indeks virusa je več kot 4, koncentracija DNA v virusu pa je več kot 105 kopij DNA / ml. Če je koncentracija virusa nižja in je raven transaminaze normalna, lahko govorimo o pasivnem prevozu.

Pred imenovanjem protivirusnega zdravljenja je pogoj za diagnostiko PCR, in sicer kvantitativni pregled, predpogoj za določanje virusne obremenitve.

Analiza opravi vsake 3 mesece in če se virusno obremenitev poveča 10-krat, potem lahko govorimo o odpornosti virusa na zdravljenje.

Kvantitativna analiza zagotavlja zelo pomembne informacije, saj lahko ugotovite, koliko DNA vsebuje patogen. Večja je število, večja je viralna obremenitev in težje bolnikovo stanje. Z zmanjšanjem virusne obremenitve po zdravljenju lahko ocenimo njegovo učinkovitost. V nekaterih primerih je PCR za hepatitis pokazatelj dodatnega pregleda, kot je biopsija jeter. Pri povišanih koncentracijah ALT se izvaja PCR. Analiza Transkripcija je naslednji: če virusna obremenitev 105kopy DNA / ml in vrednosti ALT višja kot normalna, vendar ne več kot 2-krat več kot šest mesecev, bolnik potrebuje biopsijo. Pri hudi vnetji ali fibrozi je indicirano protivirusno zdravljenje. Če raven ALT presega normo več kot 2-krat z visoko virusno obremenitvijo, takoj predpisuje zdravljenje brez dodatne diagnoze.

Samo dobri strokovnjaki lahko pravilno razširijo rezultate kvantitativne PCR.

PCR kvalitativno

Kvalitativna analiza vam omogoča ugotavljanje prisotnosti virusa hepatitisa v krvi. Običajno bi moral biti odsoten. Zahvaljujoč tej metodi lahko natančno določite diagnozo.

Kvalitativna analiza PCR daje 100% natančen rezultat.

Nobena druga metoda ne daje tako zanesljivih podatkov. V več kot polovici primerov po prehodu diagnoze se odkrije DNK virusa, če antigena ni. Zelo pomembno je ugotoviti diagnozo v začetni fazi bolezni.

Dokazano je, da če se DNA DNA virusa hepatitisa B aktivno multiplicira v človeškem telesu v dveh mesecih, postane bolezen kronična. Če se bomo v prvih tednih po okužbi borili proti virusu, so možnosti za popolno okrevanje zelo visoke.

Kako je razlaga rezultatov ankete pridobljena z uporabo kvalitativne metode?

Analiza analize je zelo preprosta:

Običajno mora biti rezultat negativen, to pomeni, da DNA ni odkrit. Pozitiven rezultat kaže na prisotnost hepatitisa.

Analiza pomaga prepoznati virus, določiti njen genotip in začeti pravočasno zdravljenje. Zelo pogosto se v prisotnosti DNK skupaj s kvalitativno oceno izvede tudi kvantitativna.

Kako se pripraviti na raziskavo?

Pri analizi hepatitisa s pomočjo diagnoze PCR se krvi vzamejo iz vene. Prehod ali izvedba pregleda je boljša od jutranja, saj je treba kri vedno prenašati na prazen želodec (po zadnjem sprejemu hrane naj mineva manj kot 8 ur).

Da bi bila analiza čimbolj zanesljiva, se mora bolnik zavedati nekaterih dejavnikov, ki lahko vplivajo na končni rezultat:

Preden darovate krv iz vene, morate počivati ​​20 minut. Poleg tega, da se analiza daje na prazen želodec, tako da za 12 ur ne morete piti, kaditi, igrati šport in jesti maščobno hrano. Nekatera zdravila, ki jih mora bolnik jemati, lahko vplivajo na končni rezultat. Laboratorijski pomočnik mora vedeti o primeru zdravljenja odvisnosti od drog. Če je krv treba dati otroku, mlajšemu od 5 let, nato pa čez pol ure pred diagnozo je treba dati vsakih 10 minut. čez kozarec kuhane vode.

Zelo pomembno je, da se v kliniki, ki se je izkazala za dobro, podvrže PCR. Konec koncev, kljub dejstvu, da PCR določa prisotnost virusa s točnostjo 100%, se ta številka lahko zmanjša na 95%, če upoštevate človeški faktor.

Nekvalificirani laboratorijski tehniki ali slab ugled klinike lahko povzročijo napačne rezultate.

Verižna reakcija v polimerazah - informacije za bolnike

Vsebina

Verižna reakcija s polimerazo (PCR) je kompleksna laboratorijska metoda, ki se pogosto uporablja v medicini in drugih vejah znanosti. Diagnostika PCR je pravočasno postala velik odmik v znanosti. Lahko rečemo, da je to eno najpomembnejših odkritij 20. stoletja v medicini. Za odkritje metode Keri Mullis, znanstvenik-biokemik, je leta 1993 prejela Nobelovo nagrado.

Od antičnih časov, okužbe zbirajo grenak davek od človeštva. V srednjem veku je samo kuga vzela na stotine tisoč življenj. V uspešnem boju proti epidemijam je pomembna točka točna in pravočasna diagnoza.

Študije PCR običajno potekajo v laboratoriju na kliniki. Kljub dejstvu, da je PCR test za okužbo drag, cena nadomešča visoko natančnost. Za vzpostavitev natančne diagnoze je dovolj, da naredimo analizo enkrat. Druge metode lahko zahtevajo dodatne ali ponavljajoče se analize.

Kako je analiza za nalezljive bolezni

Najpogosteje uporabljeni za diagnozo okužb so serološke in kulturne metode. V prvem primeru se določijo protitelesa proti povzročitelju okužbe v krvnem serumu. V drugem primeru se biološki material, ki ga dobi bolnik, uporabi za inokulacijo posebnega medija, ugodnega za rast kolonij patogena. V obeh primerih lahko diagnostika traja dneve ali celo tedne.

PCR pregled se lahko opravi z vsemi biološkimi materiali, pridobljenimi od bolne osebe. Krvne in druge biološke, fiziološke in patološke tekočine in mediji so lahko vzorci. PCR se lahko izvaja z urinom ali iztrebki.

Najpogosteje se z metodo PCR uporablja za določanje virusnih in netipičnih okužb, saj morda ne morejo biti podvržene rutinski diagnozi zaradi specifičnega patološkega procesa, ki ga povzročajo. Da bi diagnosticirali te okužbe, potrebuje čas, da telo razvije protitelesa, ki jih določajo serološke metode. Vendar pa je to v nekaterih primerih nesprejemljivo.

S pomočjo PCR lahko virus človeške imunske pomanjkljivosti določimo v dneh ali tednih, kolikor je to mogoče natančno, brez seronegativnega okenskega obdobja, značilnega za druge metode. (Seronegativno okno - interval od trenutka okužbe, v katerem telo še ni začelo proizvajati dovolj, da bi določilo število protiteles).

Metoda PCR in vitro je laboratorijsko določanje okužbe v izoliranih vzorcih bolnikov.

Za izvedbo polimerazne verižne reakcije je potreben sklop posebnih reagentov.

V epruvetah z reagenti dodamo preskusni material. Cevi so nameščene v posebno napravo - PCR ojačevalnik. Omogoča povečanje (povečanje števila) želenih fragmentov DNA ali RNA. Ojačevalnik PCR se zažene v cikličnem načinu. Vsak cikel, če je v vzorcih prisotna DNA ali RNA zaporedje patogena, kopice fragmentov teh nukleinskih kislin kopičijo v raztopini. V vzorcih lahko ugotovite prisotnost patogena in njegovo število.

Vrste PCR

Analiza kakovosti PCR daje naslednji rezultat:

  • PCR - negativni, želeni patogen v vzorcih ni bil zaznan;
  • PCR - pozitiven, v vzorcih je bilo najdenih zaporedij, ki so specifične za določen patogen.

Ko je rezultat PCR pozitiven, je s 95% natančnostjo, ki kaže na prisotnost diagnosticirane okužbe. Natančnost kompleta PCR za diagnostiko doseže 100%.

5% napačnih rezultatov je običajno odvisno od človeškega dejavnika. Tako lahko kršitve pravil za shranjevanje reagentov in tehnik za izvedbo študije znatno zmanjšajo natančnost analiz.

Kvantitativna PCR analiza opredeljuje tak koncept kot virusno obremenitev. Hkrati je mogoče ugotoviti, koliko sklopov DNA patogena je bilo v vzorcih, ki so jih dobili od pacienta. Bolj - težja je okužba. Tudi uspeh zdravljenja se lahko določi z zmanjšanjem virusne obremenitve.

Dostava biomateriala za PCR

Dostava PCR analize poteka na kliniki, navadno zjutraj. Med obiskom zdravnika boste obveščeni, da morate dati: kri, urin, brisanje ali strganje. PCR lahko zazna patogene snovi, ne glede na stopnjo kontaminacije snovi.

V teoriji je za pozitivno analizo dovolj prisotnost samo enega patogena v vzorcih. V praksi poskušajo ustvariti ugodnejše pogoje. Za to obstaja nekaj pravil:

  • če daste mast ali strganje iz genitalij, se morate vzdržati spolnih dejanj 3 dni pred testom;
  • Na predvečer testa ne uporabljajte barv ali brizg z antibakterijskimi sredstvi;
  • 3 ure, preden se vzamete iz sečnice, morate biti potrpežljivi in ​​ne mokri.

V primeru, ko pacient da krvi, ne morete upoštevati teh pravil.

Rezultati študije

Rezultati PCR so ponavadi pripravljeni v 24 urah po preskusu. Kvalitativna analiza izgleda preprosto. PCR dekodiranje ni potrebno, saj ponavadi prvi stolpec označuje povzročitelja, v drugem - rezultat. Na primer:

PCR testi

Polimerazna verižna reakcija velja za eno najbolj natančnih in najhitrejših metod diagnosticiranja številnih nalezljivih bolezni. Uspešno se uporablja tudi v kriminologiji, da bi poenostavili postopek identifikacije kriminalcev, s svojo pomočjo pa vzpostavijo očetovstvo z visoko natančnostjo.

Bistvo metode PCR

Vsak živi organizem, vključno z bakterijami in virusi, ima edinstvene gene, ki so del strukture DNA ali RNA v določenem zaporedju. Med testom PCR se genski material večkrat kopira pod vplivom DNA polimeraze in posebnih temperaturnih ciklov.

Obstajajo dve glavni metodi polimerazne verižne reakcije:

  1. Klasična metoda je izolacija genetskega materiala patogena z metodo elektroforeze;
  2. PCR v načinu "realnem času".

Metodologija sestavljajo tri glavne faze:

  • Priprava preskusnega vzorca;
  • Ojačanje DNK;
  • Odkrivanje (identifikacija) genskega materiala domnevnega patogena.

Za izvedbo raziskave je treba laboratorij PCR razdeliti na 3 obmoćja, pri ćemer vsako fazo reakcije izvajamo strogo v sobi, namenjenem za to. Vsako območje mora biti opremljeno s potrebno opremo, razpršilci, potrošnim materialom, zaščitno obleko, ki se uporablja samo v tej sobi.

Po registraciji in označevanju vzorcev v prostoru za pripravo vzorca se DNA iz DNA ali RNA patogena izolira iz preskusnega materiala z izpostavljenostjo določeni temperaturi in posebnim reagentom. Nato se začne postopek ojačanja - ustvarjanje številnih kopij edinstvenega fragmenta DNA. Sestavljen je iz treh glavnih stopenj:

  • Denaturacija DNK - pod vplivom visoke temperature (95 stopinj), dvojno vijačnico DNK razklenimo v 2 verig.
  • Žarjenje primerje - na koncih DNA verig pridružila posebno sintetično spojino (začetni oligonukleotidi), ki sta enaka genetska informacija na koncih želenih fragmentov nukleinskih kislin. Temperatura, potrebna za pripravo praška, je posamezna za določen primer, v območju od 50 do 65 g.
  • Z uporabo DNA polimeraznega encima pri 70-72 stopinjah je podobna regija DNA (amplicon) zasnovana med obema primerjema. Kot "gradbeni material" se uporabljajo posebne snovi, dodane epruveti.

Cikluse pomnoževanja se večkrat ponovijo, zato se ekstrahirana DNA kopira večkrat, kar poenostavlja proces njegove identifikacije. Identifikacija se lahko opravi vizualno po izvedbi postopka elektroforeze izdelkov za ojačitev v agaroznem gelu ali samodejno s pomočjo tehnike v realnem času.

Pri uporabi metode PCR v realnem času ojačanje in odkrivanje poteka hkrati v posebnih napravah. Ta metoda je najprimernejša, ker se preskus izvaja v zaprtih epruvetah, zmanjša se nevarnost kontaminacije in posledično se izdajajo lažno pozitivni rezultati.

Prednosti in slabosti metode

  • Študija traja le nekaj ur, v nasprotju z dolgimi klasičnimi mikrobiološkimi metodami;
  • Visoka specifičnost od 95% do 100%, ker želeni fragment DNA je edinstven za vsak specifičen mikroorganizem;
  • Visoka občutljivost metode je mogoče zaznati patogen, tudi če je v vzorcu, ki ga proučuje, samo ena celica;
  • Ugotoviti, da je patogen lahko kvalitativna in kvantitativna metoda. To je zelo pomembno pri dodeljevanju oportunističnih mikroorganizmov, ki v majhnem številu ne povzročajo bolezni;
  • Sposobnost določanja genotipa patogena (hepatitis C, okužba s HIV). To je potrebno za racionalno zdravljenje in prognozo morebitnih zapletov;
  • Sposobnost prepoznavanja genetske nagnjenosti k bolezni in s tem preprečevanja njenega razvoja;
  • Možno je izolirati skoraj vsak vir okužbe, sodobne metode pa omogočajo identifikacijo celotne mikroflore v vzorcu, na primer biocenozo vagine.
  • Možnost pridobitve lažnega pozitivnega in lažnega negativnega vzorca, če se ne upoštevajo pravila za vzorčenje vzorcev, napake med raziskavo;
  • Visoki stroški analize.

Uporaba

PCR lahko praktično raziskovati vsak vzorec (kri, urin, likvor, cervikalni ostružki iz kanala in sečnice, lasnih mešičkov, semena, itd). Ta tehnika se pogosto uporablja za diagnozo spolno prenosljivih bolezni (gonoreja, klamidija, ureaplasmosis, mikoplazmozo, trihomoniaze). Lahko se uporablja za identifikacijo sredstva za tuberkulozo, davico, pljučnica, virusnega hepatitisa, okužbe s HIV, toksoplazmoze, citomegalovirusa in virus herpesa okužbe, salmonele, itd

Uporablja verižne reakcije s polimerazo za očetovski s primerjavo DNA starši in otrokom, da prepoznajo genetske nepravilnosti in genske predispozicije organizma na različnih bolezni.

Priprava za analizo

  • Priporočljivo je krvo dajati strogo na prazen želodec.
  • Preden vzamete mast iz sečnice ali materničnega kanala, se je treba v treh dneh vzdržati spolne aktivnosti, analiza je treba opraviti najkasneje en mesec po koncu zdravljenja z antibiotiki, sicer je lahko rezultat napačen. Metoda PCR razkriva DNK celo mrtvega patogena, zato je bolje opraviti test po popolni prenovi celic.
  • Urin je treba zbrati v sterilni posodi.

Odgovor bo ponavadi pripravljen v nekaj dneh, odvisno od zmogljivosti laboratorija.

Pojasnilo rezultatov

Pri uporabi kvalitativne tehnike je lahko samo dva odgovora: pozitivna ali negativna. Pozitiven rezultat kaže na prisotnost izločenega mikroorganizma v vzorcu, negativen rezultat kaže na odsotnost.

Kvantitativni rezultat mora oceniti zdravnik, ki je prisoten, v posameznem primeru se uporablja individualni pristop. Specialist, ob upoštevanju prejetega odgovora, rešuje vprašanje potrebe po zdravljenju, odmerek pripravkov, določa obliko in stopnjo bolezni.

Pri ugotavljanju genetskega profila (predispoziciji trombofiliji, raku dojke) po dešifriranju rezultata lahko zdravnik oceni stopnjo tveganja bolezni in predpiše posebne diete, preventivne ukrepe.

Je bila stran uporabna? Delite v priljubljeno družabno omrežje!

Kvantitativna analiza PCR je namenjena določanju koncentracije

Metoda verižne reakcije s polimerazo (PCR) je danes ena izmed najučinkovitejših diagnostičnih metod.

Zagotavlja najbolj natančne in zanesljive rezultate.

Gradivo študije je:

S pomočjo PCR se diagnosticirajo tudi skrite okužbe, zlasti spolno prenosljive okužbe.

Bistvo takšne analize leži v odkritju v preiskovanem gradivu genoma patogena z večkratnim sintetiziranjem molekul njegove DNA.

Z uporabo PCR lahko diagnosticirate bakterijske, virusne, protozoalne in glivične okužbe.

Največja napaka v takšni študiji ne presega 5%.

Poleg tega se lahko njegovi rezultati pridobijo že na dan testiranja.

Obstajata dve vrsti PCR analize:

Kvalitativna metoda se izvaja z namenom detekcije v biomaterialu povzročitelja bolezni.

Kvantitativna analiza PCR

Verižna reakcija s polimerazo je metoda laboratorijske diagnostike.

Test PCR se uporablja v medicini.

To je zaradi visoke natančnosti.

Metoda temelji na DNA mikroorganizmov.

Izvedite PCR diagnostiko, praviloma v laboratoriju.

Ko je potrebna kvantitativna analiza PCR brisov in krvi

Ta metoda se uporablja pri urologiji, ginekologiji, venereologiji.

Najpogosteje je potrebno postaviti diagnozo.

S pomočjo PCR testiranja je možno odkriti bolezni, kot so:

  • Gonoreja
  • Syphilis
  • Ureaplazmoza
  • Klamidija
  • Trichomoniasis
  • Humani papilomavirus.

Ta metoda se uporablja pri pripravi krvi darovalca.

Pomaga preprečiti tveganje transfuzije okužene krvi.

Kvantitativna analiza PCR je usmerjena v določanje koncentracije patogena v telesu, t.j. oceno stopnje "nalezljivosti" bolnika.

Kvantitativni PCR je nepogrešljiva metoda za laboratorijsko diagnosticiranje virusnega hepatitisa C.

Z njeno pomočjo določite vsebnost krvi v pacientovem RNA virusu, ki jo izrazite v ME (mednarodne enote) ali kopije na 1 ml.

V primerih, ko je že diagnosticiran hepatitis C, se izvede kvantitativna PCR analiza v skladu z naslednjo shemo:

Ali se je treba nekako pripraviti na kvantitativno analizo PCR?

Ne, v tem primeru ni potrebno posebno usposabljanje.

Edini pogoj je prepoved kajenja 30 minut pred darovanjem krvi.

PCR kvantitativni: hepatitis C

Hepatitis C - nalezljiva bolezen, ki prvenstveno prizadene jetra.

Okužba prodre skozi kri.

Da bi ugotovili povzročitelja bolezni, se uporablja kvantitativni PCR test.

Določa koncentracijo patogena v pacientovi krvi.

Da bi določili obseg bolezni, se RNA izvede kvantitativno proti hepatitisu C.

Najpogosteje se PCR hepatitisa C izvede po odkritju ustreznih protiteles.

Po tem se test opravi na 4, 12, 24 in leto kasneje.

Rezultati kvantitativne analize PCR pri diagnozi hepatitisa C

Pomembno je, da predamo pravilen material za analizo PCR.

Kljub temu morate biti sposobni pravilno dešifrirati rezultate.

Kako interpretirati rezultate kvantitativne PCR analize pri diagnozi hepatitisa C in ugotoviti učinkovitost zdravljenja?

Omeniti velja, da ima virus hepatitisa C izredno heterogenost, stabilnost v zunanjem okolju.

S svojo nizko koncentracijo v krvi verjetno ni verjetno, da bi ga poslali navpično ali s spolnim stikom.

Okužbe in bolezni se v takih primerih pogosteje pojavijo pri ljudeh z oslabljeno imuniteto.

Ali sočasne nalezljive bolezni genitalnega trakta (HIV, spolne okužbe).

Venereolog, da prenese kvantitativno analizo PCR

Zapomni si! Samo zdravnik mora dekodirati podatke.

Lažen rezultat je možen.

Odvisno je od transporta materiala, delovnega mesta, na katerem je bila odvzeta krv za raziskovanje, kršitve tehnologije za izvedbo analize.

Zato morate pri izbiri laboratorija posvetiti največjo pozornost.

PCR raztrgamo kvantitativno za klamidijo

Preden vzamete test PCR za to okužbo, morate vedeti, kako pravilno pripraviti analizo.

Pozor, prosim! Ženske med menstrualnim ciklusom ne vzamejo materiala.

Raztrgati je treba le, če se upoštevajo nekatera pravila:

  • Pred testiranjem ne uporabljajte vaginalnih svečk
  • V času analize od trenutka spolnega odnosa zavrnite
  • Dva tedna pred raziskavo upoštevajte antibiotike

Raztrganje žensk se vzame iz vagine.

Moški se strgajo iz sečnice.

Material se zbere s posebno sterilno sondo, nato pa se postavi v sterilno cev.

Rezultat je lahko:

  • Negativno - v biomaterialu ni okužbe;
  • Pozitivno - V razmazu je klamidija.

Kvantitativna PCR analiza: HPV tipa 21

S to metodo lahko takoj ugotovite vrsto virusa.

Ta vrsta HPV je pogosta.

Obstaja več kot 100 vrst HPV.

Večina jih vpliva na kožo, preostanek sluznice.

Razvrstite vrste, ki lahko povzročijo raka, kot je rak materničnega vratu.

Za analizo se opravi odstranitev epitelijskih celic iz materničnega vratu.

Rezultati so lahko naslednji:

  • Ni ugotovljeno tveganje 0-3 Lg (HPV / 105)
  • Možna pojavitev displazije 3-5 Lg (HPV / 105)
  • Velika verjetnost displazije 5 in nad Lg (HPV / 105)

PCR DNA: odkrit

Rezultat analize PCR je bil pozitiven - v biološkem materialu pacienta so našli fragmente DNA mikroorganizma.

Če dobite ta rezultat, začnite zdravljenje čim prej.

Obstajajo časi, ko je rezultat pozitiven, vendar se oseba dobro počuti in nima nobenih znakov bolezni.

To lahko pomeni, da je bolezen v zgodnji fazi.

V tem primeru se morate posvetovati z zdravnikom in začeti zdravljenje.

Pozor, prosim! Rezultat analize ni diagnoza. Načrt zdravljenja mora predpisati zdravnik.

Če je potrebno, bo strokovnjak imenoval za opravljanje ponovljenih študij,

Kateremu zdravniku naj se obrne na dostavo kvantitativne analize PTSR

Da bi naredili kvantitativno analizo PCR, se morate obrniti na kliniko.

Sodobna laboratorijska oprema zagotavlja natančnost analize PCR.

Ob obisku venerologa si lahko vzameš brisanje.

Zdravnik bo pregledal in vzel material za študijo.

Po prejemu rezultata vam bo strokovnjak pomagal razbrati rezultat in predpisati potrebno zdravljenje.

Poiščite izčrpno posvetovanje izkušenega venereologa, prenesite kvantitativno analizo PCR-ja, pa tudi učinkovit tečaj zdravljenja, ki ga lahko uporabite pri našem plačanem KVD-ju.

Ne pozabite, da je kvalitativna in pravočasna diagnosticiranje ključnega pomena za uspešno zdravljenje in možnosti za ozdravitev.

O tem, kako kvantitativno
PCR analiza pravi
poročnik polkovnik zdravstvene službe,
zdravnik Lenkin Sergej Gennadievich

Če potrebujete kvantitativno analizo PCR, vključno s hepatitisom C, se obrnite na avtorja tega članka - venereologa, urologa v Moskvi, ki ima 15 let izkušenj.

  • kri
  • urina
  • sok iz prostate
  • semenska tekočina
  • kvalitativno in kvantitativno
  • Pred začetkom zdravljenja
  • 1 teden po začetku zdravljenja
  • V 4. tednu zdravljenja
  • V 12. tednu - v tem času kvantitativna določitev PCR omogoča ovrednotenje učinkovitosti trenutnega zdravljenja bolezni
  • Na 24. teden zdravljenja - zaključni izpit za potrditev ozdravitve
  • Visoka je viramzija ali virusna obremenitev (koncentracija virusa v krvi) 800.000 ie / ml.

Pridobivanje takih rezultatov pomeni akutno fazo bolezni ali ponovno aktivacijo virusa.

Ta kazalnik kaže na visoko stopnjo infektivnosti, "nalezljive" pravice. Dejstvo, da je v tem trenutku nevarnost sklenitve virusa z njim zelo visoka.

  • Indikator 400 000 IE / ml kaže nizko vsebnost virusa.

To je mogoče opaziti z visoko stopnjo odpornosti telesa.

Posledično se množenje in aktivnost virusa zatirata. Ali zaradi okrevanja, zahvaljujoč učinkoviti terapiji.

V nekaterih primerih rezultati analize kažejo kazalnik "pod merilnim območjem".

To pomeni, da je koncentracija virusa v krvi zanemarljiva.

Toda še vedno je prisoten virus v telesu, kar potrjuje kvalitativno PCR.

Vnos v obrazec z rezultati analize "Ni zaznan" pomeni, da v pacientovi krvi ni virusa

Analiza PCR za hepatitis C

Diagnoza hepatitisa vključuje celoten sklop testov za ugotavljanje prisotnosti virusa v krvi. Eden od načinov za odkrivanje bolezni je uporaba metode, kot je PCR za hepatitis C. Kaj je to, zakaj je PCR analiza hepatitisa tako pomembna, kako se izvaja in dekodira?

Kaj je to?

Verižna reakcija s polimerazo ali PCR se uporablja za diagnosticiranje razjed želodca, kolitisa, enteritisa. Njena glavna prednost pa je, da pomaga odkriti v telesu sam virus hepatitisa C in protitelesa proti njej, ki imajo sposobnost, da ne reagirajo imunski sistem zaradi njihove zmožnosti mutiranja.

Študija in njeno bistvo sta ustvariti določene pogoje, pod katerimi se pojavi verižna reakcija s hepatitisom RNA. Če se v primerjavi z nukleotidno sekvenco virusa hepatitisa C pojavi naključnost, to kaže, da v krvi obstajajo virusni delci, in se razpad pojavlja v jetrih. Če je količina virusa pod določeno stopnjo, se opravi negativna diagnoza, če je višja - pozitivna.

Obstajajo dve vrsti krvnih preiskav z metodo PCR za hepatitis: kvantitativna analiza in kvalitativna analiza.

Kvantitativni PCR, kot je omenjeno zgoraj, določa koncentracijo RNK virusa hepatitisa. Poleg tega je sposoben zagotoviti podatke o intenzivnosti, s katero se razvije patologija, in učinkovitosti predpisanega zdravljenja. Kvantitativna analiza za hepatitis C je izredno pomembna, saj določa odpornost proti delovanju protivirusnih zdravil in omogoča prilagajanje terapije.

Po tem, ko je bil bolnik zdravljen, PCR pomaga določiti nadaljnji red receptov. V nekaterih primerih so potrebne dodatne raziskave. Na primer, če se raven ALP poveča (vendar ne več kot 2-krat v polletju), analiza pa kaže na virusno obremenitev nad 105 IU / ml, se bolniku dodeli biopsija. Če kvantitativna analiza na PCR odkrije močno vnetje in fibrozo, je bolniku predpisan potek zdravljenja z protivirusnimi zdravili.

V primerih, ko se veliko število virusnih delcev kombinira z visoko ALT, je treba bolnika nemudoma zdraviti brez dodatnih diagnostičnih ukrepov.

Vzemite ta test in ugotovite, ali imate težave z jetri.

Kakovostno razvozlati kazalniki za kvantitativno analizo krvi le usposobljeni in izkušeni strokovnjaki lahko hepatitis in sodobna tehnologija omogoča, da se na nizke koncentracije virusa v krvi.

Kvalitativna PCR analiza je namenjena ugotavljanju in potrditvi dejanske prisotnosti virusa v telesu. Izvaja se z odkrivanjem protiteles proti hepatitisu v krvi. To je kvalitativni test za hepatitis jamči za točnost rezultata za 100%, in vam omogoča, da diagnosticirati v zgodnjih fazah bolezni, ki omogoča, da v boju proti hepatitisu B v prvih tednih po okužbi in povečuje možnosti za popolno okrevanje (v primeru bolezni tipa B).

Prednosti PCR

Pri raziskovanju metode PCR in razkritju krvnega testa na hepatitisu je mogoče določiti tudi genotip povzročitelja bolezni. Obstaja 6 genotipov virusa in veliko število podtipov, toda v naši regiji je porazdelitev 1, 2 in 3 genotipov.

Druge prednosti te vrste diagnoze so:

  • Visoka natančnost prejetih kazalnikov in majhna verjetnost napak v njih;
  • visoka stopnja občutljivosti na virusne delce v krvi;
  • možnost odkrivanja več patogenov;
  • diagnostika patogenih intracelularnih mikroorganizmov, ki imajo visoko antigensko spremenljivost;
  • delo z dekodiranjem analize o hepatitisu omogoča odkrivanje latentnih tokovnih okužb.

Komu imenuje

Analiza PCR za hepatitis nujno vključuje naslednje kategorije ljudi:

  • nosečnice;
  • zaposleni v zdravstvenih ustanovah;
  • potencialni darovalci krvi in ​​organov;
  • tiste, ki imajo značilne znake bolezni;
  • Okužene s HIV;
  • odvisniki od drog;
  • osebe, ki vodijo promiskuitetno spolno življenje.

Kako se izvaja analiza in je potrebno usposabljanje?

Vzorčenje krvi za PCR poteka iz vene. Običajno se to zgodi zjutraj, preden je oseba pojedla, ker mora po jedi opraviti najmanj 8 ur. V ekstremnih primerih lahko krv pregledamo dnevno ali zvečer, časovna razlika med analizo in vnosom hrane pa mora biti vsaj 5 ur.

Človeški dejavnik lahko kvantitativno vplivajo na rezultate: njihova natančnost v nekaterih primerih zmanjša iz 100% na 95%, zato je darovanje krvi, je potrebno pripraviti vnaprej. Kakovost biomateriala za analizo bo primerna, če pacient upošteva naslednja pravila:

  • Pred dajanjem krvi lahko pijete samo čisto vodo;
  • dva dni pred študijo zavrniti od vnosa ocvrtih in maščobnih živil ter alkoholnih pijač;
  • dan pred obiskom v laboratorij naj preneha jemati zdravilo. V primeru, da to ni mogoče, je nujno potrebno opozoriti laboratorijskega pomočnika in zdravnika, ki o tem poroča;
  • na predvečer stresnih situacij in fizičnega napora;
  • Ne gredo skozi ultrazvočne, radiološke in instrumentalne študije tik pred krvno donacijo;
  • uro pred analizo se mora vzdržati kajenja;
  • 20 minut pred dostavo krvi je treba motiti, pomiriti in celo dihati.

Če študija gre za otroka, mlajšega od 5 let, morajo starši poskrbeti, da je bil vsakih 10 minut pitne vrele vode, da pol ure pred zaužitjem biomateriala.

Pojasnilo prejetih podatkov

Analiza je lahko predstavljena z besedami (v primeru kvalitativnih raziskav), na primer "ni mogoče najti" ali "pod obsegom sprememb". V prvem primeru to pomeni, da okužba ni bila odkrita. V drugem - da je virus prisoten, vendar v majhnem obsegu. Ta položaj zahteva ponovno preučitev.

Virusna obremenitev se določi s količino infektivne RNK in se označi kot ME / ml ali kopije / ml.

Normalni indikator (norma) kvantitativne analize za hepatitis C je razpon od 1,8x102 do 2,4x107 ie / ml.

Koncentracija virusa v krvi je lahko:

  • nizka: od 600 ie / ml do 3x10 4 / ml;
  • povprečje: od 3x10 4 ie / ml do 8x10 5 ie / ml;
  • visoka: več kot 8x10 5 ie / ml.

Kvantitativna in kvalitativna analiza PCR za hepatitis omogoča ugotavljanje prisotnosti virusa v telesu in ravni njegove koncentracije. Polirazmernaya verižno reakcijo lahko za diagnosticiranje bolezni v povojih, vendar je treba bolnike čimprej obravnavajo v zdravstvenih ustanovah za pomoč in strogo upoštevati priporočila lečečega zdravnika.

Zakaj boste morda morali dati kri v PCR

Zanesljiv, hiter in zelo občutljiva diagnostična metoda za identifikacijo sredstva, ki lahko različnih infekcijskih bolezni, z ugotavljanjem njihove genetski material (DNA ali RNA) v vzorcih, dobljenih pri pacientu proučuje imenujemo verižna reakcija s polimerazo (PCR).

PCR analizo (polimerazno verižno reakcijo) je najprej razvila ameriška Cary Myullis leta 1983. Tehnologijo je takoj patentirala družba Cetus Corporation. Leta 1992 je bil patent prodan družbi "Hoffmann-La Roche," toda na koncu se je izkazalo, da so bili številni znanstveniki iz različnih držav ob istem času delo na tem področju, ki so prispevali k razvoju novih tehnologij za prepoznavanje infekcijam.

Takrat je veliko znanstvenikov PCR metoda, imenovana "revolucionarni" preboj za virologi in strokovnjakov nalezljivih bolezni, zaradi česar je mogoče, da bi dobili rezultate analize v nekaj urah, namesto čakanja na informativnih dnevih in tednih, kot je potrebno prej.

Bistvo metode PCR

Bistvo metode polimerazne verižne reakcije je v večkratnem povečanju najbolj nepomembnih koncentracij fragmentov DNA v kateremkoli vzorcu. Za to:

  1. Majhna količina biološkega materiala se postavi v poseben reaktor v epruveti (slina, kri, urina, izločanje iz genitalnih organov), v katerem se lahko nahajajo fragmenti DNA mikroorganizma.
  2. Za ta material dodamo posebne encime, ki se vežejo na DNA mikroorganizma, sintetizirajo njegovo kopijo.
  3. Reakcija DNA replikacije poteka v skladu z načelom verižne reakcije v več fazah:

  • od 1 molekule DNA 2 nastanejo nove molekule;
  • druga stopnja - 4 nove molekule se oblikujejo iz obstoječih 2 molekul;
  • po vrsti ciklov, namesto 1 kopije DNA, so pripravljeni preučiti več sto / tisoč izvodov.

Prednosti PCR pred drugimi metodami diagnoze

Zaradi očitnih prednosti, ki kaže analiza PCR na STI, da je potrebno za izvedbo natančnost in selektivnost dobljenih rezultatov, kot reagent v PCR pristopi k okužbi DNK tako kot ključavnico in ključ - za vsak povzročitelj bolezni svojega agenta. Isti bakposev je priznan kot neločljivo občutljiva metoda, znana že dolgo, je delala do navadnih del, čeprav bolj težavna. Vendar pa glede na čas izvedbe pridelka opazno izgubi molekularne metode diagnoze.

Tudi dejstvo, da je za vsako patogen potrebuje svoj rastni substrat, in za klamidijo, na primer, da je zelo drago, ni mogoče šteti kot odločilni dejavnik za določitev analizo razširjenosti, kako je potrebno bolnika le, da prenese strganje sečnice v PCR.

Kot se je izkazalo, da je razlika IFA s PCR ne omogoči, da prepozna encimski postopek imunološki je bolje, saj je ista klamidija povzroči reakcijo človeškega imunskega sistema v obliki proizvodnje IgA, IgM, IgG, slednji pa se shranijo v krvi v enem letu po polnem zdravljenju, da in na prvi pogled povzroča nejasne rezultate laboratorijskih študij - ELISA pozitivni PCR negativni (protitelesa so na voljo in DNA mikroorganizma ni, ker je bolnik že ozdravljen).

Poleg tega, oslabljen zaradi močnih okužb, lahko imunski sistem zavleče proizvodnjo protiteles, specifičnih za ELISA, ali jih sploh ni mogoče proizvesti. V tem primeru so rezultati analize naslednji: ELISA negativen PCR pozitiven, kar kaže na nastanek bolezni, čeprav ni nobenih klinično-laboratorijskih manifestacij.

Bolnike spodbujamo k darovanju krvi v PCR, saj ima ta metoda naslednje prednosti pred obstoječimi tehnologijami za odkrivanje okužb, ki so bile do sedaj skrite:

  1. Visoka občutljivost metode. Imajo le nekaj molekul DNK mikroorganizma, laboratorijski strokovnjaki, ki izvajajo PCR analizo, določajo prisotnost okužbe, kar je izredno pomembno pri diagnosticiranju kroničnih, latentnih patologij. V več primerih, ko se mikroorganizem neobdeluje na druge načine, je takšna analiza edina objektivna metoda odkrivanja patogena.
  2. Vsak biološki material (sline, kri, lasje, izločki iz spolnih organov, epitelijske celice) je primeren za kvalitativno in hitro raziskovanje.
  3. Avtomatiziran postopek vam omogoča, da rezultate študije dobite po 4-5 urah. Tam je tudi najbolj moderno metodo PCR v realnem času, ko je vizualna ocena rezultatov PCR, ki je bila uporabljena metoda elektroforeze nadomesti s fluorescentnimi metod za odkrivanje ozvočenje izdelkov. Zaradi uporabe spremenjene analitične metode - pridobivanje in interpretiranje rezultatov analize postane lažje, hitrejše in zanesljivejše.
  4. Kljub univerzalnosti metode, ki temeljijo na njem, ki se razvijajo in bolj specializirane tehnologije, ki omogoča študij urogenitalnega trakta žensk izkušeni zdravnik ne razmišlja o tem, kakšne laboratorijske preiskave imenuje - femoflor ali PCR. Bilo je Femoflor, ki temelji na uporabi verižne reakcije s polimerazo, je najboljša metoda, pri čemer PCR diagnostika urogenitalnega okužb zagotavlja natančno kakovostno in količinsko sliko oportunistično in normalnem vzorcu ženskega urogenitalnega trakta v "realnem času."
  5. Zdravnik dobi priložnost, da identificira več vrst patogenov, ko pacient preide le en vzorec materiala za analizo. To pospeši proces diagnosticiranja bolezni, drastično zmanjšuje materialne stroške laboratorijskih raziskav.
  6. Kvantitativna analiza PCR je prav tako prepoznana kot pomemben dejavnik, ki določa uspešnost diagnosticiranja latentne bolezni z metodo verižne reakcije s polimerazo - oceniti učinkovitost zdravljenja pri mnogih kroničnih okužbah.

Sicer pa je nasičenost končne faze, ko so rezultat PCR kopije postane preveč, presnove omejuje deluje kot substrat (dezoksiribonukleozid trifosfati), in sam encim. Konec koncev, zaradi svojih molekul preveč matrične DNA postane produkt polimerazne verižne reakcije. Pod temi pogoji je dokončanje naslednjo fazo PCR ne spremlja podvojitev količine DNA / RNA kopijah, vendar pa je izravnavanje manjših količinskih razlik med zgodnjih in poznih vzorcev, vsaj v začetnih fazah PCR jasno pokazala razliko.

  • območje sprejema, registracije, analize in primarne predelave materiala;
  • območje izolacije DNA / RNA v ločenem prostoru;
  • območje priprave reakcijskih zmesi in PCR;
  • območje zaznavanja izdelkov za ojačanje.

Ustvarjeno dovodno in izpušno ali izpušno prezračevanje, čeprav je dovoljeno vgraditi klimatske naprave, predvideva 5-6 m³ / h dovoda zraka in 6-7 m³ / h na pokrovu. Če so kršena pravila za ureditev PCR laboratorija, so lahko rezultati analize lažno pozitivni.

Kako pravilno pripraviti na analizo?

Za pridobitev zanesljivih rezultatov študij PCR priporočamo predhodno pripravo takšne diagnostike:

  1. Preden boste dali s slino, se morate vzdržati prehranjevanja in zdravil, 4 ure pred odvzemom materiala. Neposredno pred postopkom sperite usta s kuhano vodo. Pri odvzemu vzorca za analizo z notranje površine ličnice je treba upoštevati ista pravila. Po izpiranju ust, morate malce masirati kožo na licu, da izolirate izločanje žleze.
  2. Urin za analizo se navadno zbira doma. Pravilna priprava za dobavo PCR urina je naslednja - potrebno je opraviti temeljito stranišče spolnih organov, nato pa v sterilnem plastičnem vsebniku zbrati 50-60 ml povprečnega dela urina. Za zagotovitev čistosti priprave materiala za analizo PCR za ženske je treba vključiti tampon v vagino. Moški bi morali vedno odpirati glenični penis. Med menstrualnim tokom ne morete vzeti materiala za analizo PCR.
  3. Pred dostavo sperme - se morate vzdržati spolnega odnosa 3 dni pred odvzemom materiala. Svetujemo vam, da zavrnete obisk savne, tudi ob vroči kopeli, jedo začinjeno hrano in alkohol. In 3 ure pred analizo, ki jo potrebujete za uriniranje, da se ne bi urinirali.
  4. Ko boste mimo urogenitalnega razmaza - ženske in moški morajo v 3 dneh prekiniti spolno življenje.
  5. PCR ne morete izvesti po antibiotikih - dva tedna pred preskusom je treba prenehati uporabljati antibakterijska zdravila.
  6. En teden pred analizo je treba prenehati uporabljati intimne mazila, gele, vaginalne supozitorije in douching. 3 ure pred študijem - se vzdržite urjenja. Med menstruacijo se ograja ne izvede - po 3 dneh po prenehanju krvnih izpustov lahko vzamete urogenitalno razbito za verižno reakcijo s polimerazo.
  7. PCR med nosečnostjo ima svoje značilnosti. Ker lahko brejost obdobje za okužbo škoduje plodu, ki ga STI zlasti povzročila, je zelo priporočljiva v zgodnjem obdobju nosečnosti je treba pregledati, da se ugotovi prisotnost ali odsotnost patologije, ki lahko povzroči splav, prezgodnji porod. Analiza se opravi ob registraciji v času nosečnosti - do 12 tednov.

Sorodni Članki Hepatitis